B群脑膜炎奈瑟菌重组NspA蛋白疫苗的免疫活性及其对小鼠的免疫保护作用

发布时间：2017-09-17 12:01

  本文关键词：B群脑膜炎奈瑟菌重组NspA蛋白疫苗的免疫活性及其对小鼠的免疫保护作用

  更多相关文章： B群脑膜炎奈瑟菌 奈瑟菌表面蛋白A 重组蛋白 免疫活性 免疫保护

【摘要】：目的：探讨B群脑膜炎奈瑟菌NspA原核重组蛋白诱导小鼠产生的特异性体液免疫和细胞免疫应答水平，初步评价rNspA对实验小鼠的免疫保护作用，为研制B群脑膜炎奈瑟菌蛋白疫苗提供相关实验依据。 方法：以B群脑膜炎奈瑟菌标准株MC58基因组DNA为模板，构建原核重组表达载体pGEX-6P-1/NspA，大量表达重组蛋白，经GST亲和层析纯化柱pH梯度洗脱，收集重组蛋白，采用Western-blot法鉴定。腹腔途径免疫雌性BALB/c小鼠，采用间接ELISA法检测免疫小鼠生殖道黏膜分泌液中抗NspA的sIgA抗体水平和血清中抗NspA的IgG及其亚类抗体水平，ELISA双抗体夹心法检测脾淋巴细胞培养上清中IFN-γ水平，CCK8法检测脾淋巴细胞增殖反应。按比例混合MC58菌液、免疫血清及乳兔补体，测定血清抗体体外杀菌滴度。构建小鼠感染动物模型，观察和计算rNspA对实验小鼠的免疫保护率。 结果：构建的原核表达载体pGEX6p-1/NspA，经双酶切和测序鉴定正确。通过优化诱导表达条件，rNspA能在培养上清中以可溶性状态表达，表达产物采用GST树脂纯化后经Western-blot鉴定，证实该目的蛋白的存在。腹腔途径免疫雌性BALB/c小鼠，rNspA组小鼠生殖道黏膜产生的特异性sIgA和血清特异性IgG及IgG亚类抗体水平均呈上升趋势，rNspA组小鼠生殖道灌洗液中特异性sIgA及小鼠血清中总IgG、IgG1、IgG2a、IgG3在第6周时均达到最大值，抗体效价分别为1:2800、1:8800、1:7000、1:5120和1:2800；rNspA免疫组血清IgG2a/IgG1的比值，在免疫的2w、4w、6w、8w时分别为0.795、0.637、0.710和0.624，，比值均小于1。INF-γ、IL-4的含量在第6周达到高峰，分别为300.0pg/mL、229.0pg/mL；rNspA组脾淋巴细胞刺激指数（SI）为1.61，明显高于GST和PBS对照组（P0.05）。rNspA组小鼠免疫血清稀释度为1：64时，其体外杀菌率达50%以上；rNspA免疫组小鼠感染MC58后72h内，小鼠的存活率高达100%，而对照组（GST组、PBS组）小鼠感染MC58后72h后的存活率为0。 结论： 1.成功构建了B群脑膜炎奈瑟菌表面蛋白A原核表达重组载体pGEX6p-1/NspA。 2. rNspA能诱导小鼠产生较高水平的体液免疫应答和细胞免疫应答水平，且以Th2倾向性体液免疫应答为主；可在黏膜局部诱生较高水平的特异性sIgA抗体。 3. rNspA对感染B群脑膜炎奈瑟菌的实验小鼠具有较强的免疫保护作用，免疫血清体外在补体介导下具有一定杀菌活性。
【关键词】：B群脑膜炎奈瑟菌 奈瑟菌表面蛋白A 重组蛋白 免疫活性 免疫保护
【学位授予单位】：南华大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2013
【分类号】：R378.15
【目录】：

• 英文缩略语索引4-5
• 中文摘要5-7
• 英文摘要7-9
• 前言9-11
• 实验材料11-13
• 实验方法13-26
• 实验结果26-39
• 讨论39-42
• 结论42-43
• 参考文献43-47
• 附录47-49
• 文献综述49-58
• 参考文献55-58
• 发表及及待发表论文58-59
• 致谢59

【相似文献】

中国期刊全文数据库 前10条

1 陶伊文;;一种克服子孢子疫苗缺点的设想[J];国际医学寄生虫病杂志;1991年03期

2 闻礼永;吴观陵;;日本血吸虫候选疫苗研究现状与展望[J];中国寄生虫学与寄生虫病杂志;2007年05期

3 张世勇;儿童B群脑膜炎球菌感染的预防:蛋白疫苗可诱导免疫记忆[J];国外医学.预防.诊断.治疗用生物制品分册;2002年03期

4 孙玉静;隋延仿;吴道澄;葛伟;叶菁;张秀敏;;MAGE1纳米蛋白疫苗的研制及其抗肿瘤效应[J];中华微生物学和免疫学杂志;2005年11期

5 史百芬;纯化的融合蛋白疫苗在RSV流行季节保护囊性纤维变性患儿抵抗下呼吸道疾病的效果[J];国外医学.预防.诊断.治疗用生物制品分册;1997年01期

6 廖芳;贺超;刘丽江;宋启发;万沐芬;杨振德;李雍龙;;淋球菌孔蛋白疫苗在动物体内诱导的免疫应答[J];中国妇幼保健;2005年24期

7 龙军;杨欣;曹荣月;吴洁;刘景晶;;抗动脉粥样硬化疫苗的免疫学效应研究[J];中国天然药物;2007年05期

8 ;治疗性乙肝蛋白疫苗有望打破乙肝免疫耐受态[J];透析与人工器官;2010年02期

9 熊新宇,陈元鼎;丙型肝炎病毒蛋白疫苗的研究进展[J];国外医学.病毒学分册;2004年03期

10 樊建勇;杨慧兰;王捷;关蕾;王颖;成桂明;仕瑶慧;;Hsp70-HSV-2gD融合蛋白疫苗阳离子脂质体的制备[J];中国麻风皮肤病杂志;2006年11期

中国重要会议论文全文数据库 前10条

1 徐国兴;谢茂松;傅冷西;郭健;杨娟;;体外传代培养对RPE细胞免疫活性的影响[A];中华医学会第十二届全国眼科学术大会论文汇编[C];2007年

2 周浩;游泳;徐小丽;罗毅;邹萍;;转染Foxp3的CD4+CD25- T细胞抑制NK细胞免疫活性的体外实验研究[A];第12届全国实验血液学会议论文摘要[C];2009年

3 许军;陈浩;彭红;熊俭;刘燕华;;白花蛇舌草化学成分的提取和免疫活性的考察[A];2009年中国药学大会暨第九届中国药师周论文集[C];2009年

4 戴慧;张颖;李伟京;高晓明;;猪苓多糖的免疫活性及其机制研究[A];中国免疫学会第五届全国代表大会暨学术会议论文摘要[C];2006年

5 蔡琳;甄永苏;;融合蛋白Fv-LDP免疫活性的研究[A];第四届中国肿瘤学术大会暨第五届海峡两岸肿瘤学术会议论文集[C];2006年

6 路洪娜;赵树立;祁晓阳;侯亚义;;SapC-DOPS促进巨噬细胞的固有免疫活性[A];第六届全国免疫学学术大会论文集[C];2008年

7 任晓霞;张政;蔡桂红;李玉英;王转花;;TBa过敏原表位区段的表达及免疫活性分析[A];2010年中国药学大会暨第十届中国药师周论文集[C];2010年

8 姚光国;姚文;陆扬;朱伟云;;乳酸菌肽聚糖免疫增强作用的研究[A];动物营养与饲料研究——第五届全国饲料营养学术研讨会论文集[C];2006年

9 王剑;何开泽;;川牛膝多糖的免疫活性及其水解活性片段分离研究[A];第九届西南三省一市生物化学与分子生物学学术交流会论文集[C];2008年

10 赵元;秦贵信;孙泽威;鲍男;;大豆球蛋白及β-伴大豆球蛋白在仔猪体内消化动力学研究[A];动物营养与饲料研究——第五届全国饲料营养学术研讨会论文集[C];2006年

中国重要报纸全文数据库 前10条

1 本报记者 董长青;万克森：研制适合国人的蛋白疫苗[N];北京日报;2011年

2 彭勇;治疗性疫苗有望打破乙肝免疫耐受[N];南方日报;2005年

3 长虹;旱莲草具有免疫活性[N];上海中医药报;2001年

4 ;逍遥丸———具有免疫活性的植物雌激素[N];大众卫生报;2004年

5 高珂;近亲输血可能不安全[N];健康报;2006年

6 红民;艾滋病疫苗距离我们还有多远？[N];中国医药报;2007年

7 康存栋;突破我国水产疫苗研发和生产瓶颈[N];中国渔业报;2008年

8 陈冰;激光疗肠炎[N];医药养生保健报;2008年

9 木子;六味地黄丸的强力免疫活性因子[N];大众卫生报;2004年

10 刘淑平 王东凯 张蓓;多面“出击”保证疫苗微球稳定[N];中国医药报;2006年

中国博士学位论文全文数据库 前10条

1 宋欣欣;提高HPV融合蛋白疫苗疗效策略研究[D];中国协和医科大学;2010年

2 叶菁;热休克蛋白70与MAGE-1融合基因疫苗和蛋白疫苗的构建及体内抑瘤效应的研究[D];中国人民解放军第四军医大学;2003年

3 李晓楠;手足口病新型疫苗的初步研究[D];内蒙古农业大学;2010年

4 田建卿;抑胃多肽疫苗的构建及主动免疫后对大鼠行为学和脑功能的影响[D];第二军医大学;2010年

5 马加海;热休克蛋白70与MAGE-3融合蛋白疫苗和DNA疫苗的构建及抑瘤效应的研究[D];第四军医大学;2004年

6 姜元荣;米糠免疫活性多糖的研究[D];江南大学;2004年

7 郄亚卿;融合基因ag85B-mpt64_(190-198)-mtb8.4在抗结核新型重组卡介苗以及亚单位疫苗研究中的应用[D];复旦大学;2008年

8 方芳;重组MUC1-MBP融合蛋白疫苗抗肿瘤作用机制研究[D];吉林大学;2010年

9 千新来;1. 腺病毒5型E1A下游基因c-101抗癌和化疗增敏作用及相关机理的初步研究 2. 新型HPV-16 E6/E7融合蛋白疫苗抗癌及抗转移作用研究[D];中国协和医科大学;2005年

10 叶益萍;黑鳗藤中C_（21）甾体苷类成分及其免疫活性研究[D];浙江大学;2006年

中国硕士学位论文全文数据库 前10条

1 应上云;B群脑膜炎奈瑟菌重组NspA蛋白疫苗的免疫活性及其对小鼠的免疫保护作用[D];南华大学;2013年

2 黎威;多价血吸虫蛋白疫苗的优选与原核表达研究[D];华中科技大学;2012年

3 崔珂;CpG ODN对口蹄疫重组蛋白疫苗增效作用的研究[D];吉林大学;2010年

4 胡耀华;淋病奈瑟菌nspA与1tB融合基因的表达及其重组蛋白免疫活性的初步研究[D];南华大学;2009年

5 柳旭伟;牛源金黄色葡萄球菌肠毒素的提取及其部分免疫活性的研究[D];石河子大学;2006年

6 杨洋;鸡源肺炎克雷伯菌Ⅲ型菌毛粘附基因的原核表达及免疫活性研究[D];吉林大学;2007年

7 赵莉群;重组金黄色葡萄球菌肠毒素B蛋白疫苗的制备及免疫效果评价[D];西北农林科技大学;2011年

8 谢良伊;淋球菌NspA核酸疫苗的构建及其免疫活性的初步研究[D];南华大学;2006年

9 李明玉;胶陀螺多糖的分离纯化及其生物活性初探[D];东北师范大学;2008年

10 谢长青;肺炎嗜衣原体MOMP核酸疫苗的构建及其免疫效果的初步研究[D];南华大学;2008年

本文编号：869264