子宫内膜上皮细胞整合素αvβ3超表达及其对胚胎黏附的影响

发布时间：2017-09-17 14:24

  本文关键词：子宫内膜上皮细胞整合素αvβ3超表达及其对胚胎黏附的影响

  更多相关文章： 整合素αvβ3 RL95-2细胞 超表达 子宫内膜容受性 胚胎着床

【摘要】：一、目的和意义 胚胎着床(Embryo implantation)是处于活化状态的胚胎定位、黏附、入侵并最终植入容受态子宫内膜的复杂过程。胚胎的侵入能力和子宫内膜容受性(Endometrial receptivity, ER)的建立是胚胎成功着床的关键。随着辅助生殖技术(Assisted reproductive technology, ART)的发展,个体化的控制性超促排卵方案、受精及实验室胚胎培养技术的进步使胚胎质量得到了显著提高,但低种植率始终是生殖医学领域尚未解决的难题之一。子宫内膜容受性受损可能是导致胚胎低种植率的主要原因,而无法诊断和治疗子宫内膜容受性受损是ART成功的主要障碍。因此,评估和改善子宫内膜容受性对提高ART成功率具有极其重要的临床意义,探究子宫内膜容受性标志物及其作用机制是改善内膜容受性和提高妊娠率的基础。整合素a v β3(Integrin alphavbeta3, ITGAVB3)特异性表达于子宫内膜种植窗期(Window of implantation, WOI),其表达异常使子宫内膜容受性受损,与不孕症的发生密切相关,是目前公认的子宫内膜容受性重要生物学标志之一,但其在胚胎着床过程中的具体作用机制目前仍不明确。本研究通过构建整合素α ν β3真核表达载体,使子宫内膜上皮细胞的整合素α ν β3水平超表达,观察其对胚胎细胞球状体黏附的影响,初步探讨整合素α v β3在胚胎黏附过程中的作用机制,为进一步阐明其在胚胎着床及生殖过程中的功能及分子机制提供研究基础。 二、方法 1.构建pcDNA3.1-3FLAG-ITGAV、pcDNA3.1-3FLAG-ITGB3真核表达载体,通过脂质体转染人子宫内膜上皮细胞(RL95-2细胞)。 2.经Real time RT-PCR检测整合素α v (ITGAV)、整合素β3(ITGB3)及骨桥蛋白(OPN)的mRNA表达。 3.经流式细胞术、间接免疫荧光检测IITGAV、ITGB3的蛋白表达。 4.建立Bewo细胞球状体与RL95-2细胞单层的体外胚胎着床模型,通过黏附实验观察和分析整合素αvβ3超表达对胚胎与子宫内膜上皮细胞的黏附情况的影响,经间接免疫荧光检测共培养体系ITGAV、ITGB3及OPN的表达。 三、结果 1.与单独转染pcDNA3.1-3FLAG-ITGAV、pcDNA3.1-3FLAG-ITGB3相比,ITGAV、ITGB3真核表达载体共转染使RL95-2细胞的整合素αv、整合素β3表达水平均明显升高。 2.RL95-2细胞整合素αvβ3超表达显著提高Bewo球状体与RL95-2细胞单层的黏附率(74.44±4.51%vs53.31±3.14%,P0.01),促进Bewo球状体在RL95-2细胞单层的扩展(118.26±6.00μm vs111.88Π3.72μm, P0.05)。 3.在共培养体系中,子宫内膜上皮细胞整合素avβ3超表达促进Bewo球状体整合素α v和骨桥蛋白的表达。 四、结论 1.成功构建了1TGAV、ITGB3真核表达载体。 2. ITGAV、ITGB3共转染使RL95-2细胞的整合素ανβ3水平超表达。 3.子宫内膜细胞整合素ανβ3超表达促进胚胎在子宫内膜的黏附和扩展。 4.整合素αvβ3和骨桥蛋白介导胚胎在子宫内膜细胞上的黏附与侵入,在胚胎着床中发挥重要作用。
【关键词】：整合素αvβ3 RL95-2细胞 超表达 子宫内膜容受性 胚胎着床
【学位授予单位】：扬州大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2014
【分类号】：R321.3
【目录】：

• 中文摘要2-4
• Abstract4-7
• 目录7-8
• 符号表8-10
• 前言10-12
• 第一部分 ITGAV、ITGB3真核表达载体的构建12-17
• 材料与方法12-14
• 结果14-17
• 第二部分 子宫内膜上皮细胞整合素αvβ3超表达及其对胚胎黏附的影响17-34
• 第一节 子宫内膜上皮细胞整合素αvβ3超表达及鉴定17-29
• 材料与方法17-23
• 结果23-29
• 第二节 子宫内膜上皮细胞整合素αvβ3超表达对胚胎黏附的影响29-34
• 材料与方法29-31
• 结果31-34
• 讨论34-36
• 结论36-37
• 参考文献37-40
• 综述 整合素αvβ3和骨桥蛋白在人子宫内膜容受性的建立和胚胎着床中作用机制研究进展40-47
• 参考文献44-47
• 附录47-50
• 致谢50-51
• 攻读硕士学位期间完成的论文51-52

【参考文献】

中国期刊全文数据库 前2条

1 李婷婷;方丛;贾磊;岳超敏;;小鼠早期完整胚胎诱导子宫内膜白血病抑制因子和整合素β_3表达并提高子宫容受性[J];中国病理生理杂志;2012年02期

2 牟丹蕾,白雪帆,黄长形,潘蕾,李光玉,王英鹏,杨为松;人整合素αvβ3在CHO细胞表达的研究[J];中华微生物学和免疫学杂志;2003年08期

，

本文编号：869937