磁珠为载体构建检测大肠杆菌O157:H7生物传感器

发布时间：2017-09-18 11:19

  本文关键词：磁珠为载体构建检测大肠杆菌O157:H7生物传感器

  更多相关文章： 大肠杆菌O157:H7 磁珠 漆酶 化学发光免疫分析

【摘要】：大肠杆菌O157:H7(Escherichia coli O157:H7)是产志贺毒素大肠杆菌(Shiga-producing Escherichia coli, STEC)的主要血清型,是目前公认的引起食源性疾病的重要致病菌。因此,建立快速、灵敏度高的检测方法具有重要意义。本文主要包括以下的工作：基于漆酶化学发光体系检测大肠杆菌O157:H7的免疫分析以包被有兔抗大肠杆菌O157:H7多克隆抗体的磁珠为载体。首先,包被有兔抗大肠杆菌O157:H7多克隆抗体的免疫磁珠与目标菌进行免疫反应。再加入生物素化鼠抗大肠杆菌O157:H7单克隆抗体,进行免疫孵育,形成双抗夹心结构。最后加入亲和素化葡萄糖氧化酶,从而形成一个酶催化放大系统检测大肠杆菌O157:H7。葡萄糖氧化酶催化葡萄糖产生过氧化氢,磁性分离,将过氧化氢加入到漆酶催化化学发光体系中。化学发光信号的大小与待分析物大肠杆菌O157:H7的浓度成正比。检测限可达到2.7×103 CFU mL-1,线性范围为4.3×103 CFU mL-1至1.7×105 CFU mL-1。该方法能够快速、低成本、易操作和较高灵敏度检测大肠杆菌O157:H7。
【关键词】：大肠杆菌O157:H7 磁珠 漆酶 化学发光免疫分析
【学位授予单位】：华中农业大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2013
【分类号】：R378.21;TP212.3
【目录】：

• 摘要6-7
• ABSTRACT7-8
• 1 文献综述8-25
• 1.1 大肠杆菌O157:H7简介8-16
• 1.1.1 大肠杆菌O157:H7发病及流行情况8-9
• 1.1.2 大肠杆菌O157:H7的生物学特性及发病机制9
• 1.1.3 大肠杆菌O157:H7感染的流行病学9-10
• 1.1.4 国内外检测大肠杆菌O157:H7的概况10-16
• 1.2 磁珠的功能及其应用16-21
• 1.2.1 磁珠的特性16-17
• 1.2.2 磁珠在生物学中的应用17-21
• 1.3 基于漆酶化学发光体系21-24
• 1.4 目的和意义24-25
• 2 材料与方法25-31
• 2.1 主要仪器25
• 2.2 主要试剂及主要溶液的配制25-27
• 2.3 免疫传感器的构建27-28
• 2.4 细菌的培养与计数28
• 2.5 生物素化抗体的制备28-29
• 2.6 免疫磁珠的制备及磁珠标记抗体标记率计算29-30
• 2.7 免疫过程30
• 2.8 化学发光检测30-31
• 3 结果与讨论31-48
• 3.1 生物素化鼠抗大肠杆菌O157:H7单克隆抗体的制备31-32
• 3.2 磁性微粒固定兔抗大肠杆菌O157:H7多克隆抗体的量32-33
• 3.3 实验条件的优化33-41
• 3.3.1 反应最适pH的优化33-35
• 3.3.2 鲁米诺浓度的优化35-36
• 3.3.3 漆酶浓度的优化36-37
• 3.3.4 磁珠用量的优化37-38
• 3.3.5 生物素化抗体浓度的优化38-39
• 3.3.6 亲和素化葡萄糖氧化酶浓度的优化39-40
• 3.3.7 底物葡萄糖浓度的优化40-41
• 3.4 工作曲线、检测限、重现性41-43
• 3.5 特异性43-45
• 3.6 实际样品中的检测45-47
• 3.7 讨论47-48
• 参考文献48-56
• 致谢56

【相似文献】

中国期刊全文数据库 前10条

1 李维碧;抗生素治疗大肠杆菌O157:H7感染后溶血性尿毒症综合征的危险性[J];中华医学信息导报;2000年19期

2 储峰;;大肠杆菌O157:H7与溶血性尿毒综合征:早期培养在确定病原学中的重要性[J];国外医学(流行病学传染病学分册);1991年04期

3 曾超鹏,陆家华;肠出血性大肠杆菌O_(157):H7简介[J];广西轻工业;1997年02期

4 张平平;朱叶飞;董晨;钱慧敏;朱凤才;;江苏省113株大肠杆菌O157:H7的扩增片段长度多态性分析[J];南京医科大学学报(自然科学版);2010年01期

5 汪力亚,黄上媛,王丽,李景云,周志江,苏维萍,宋华宾,张让堂;肠出血性大肠埃希菌0157:H7型检测方法的建立[J];细胞与分子免疫学杂志;1999年01期

6 李良平,徐如祥,王清华,杨志林;H7在脑损伤后血脑屏障损害中的作用[J];创伤外科杂志;2000年04期

7 薛惠贞,伊兰茹;毒性大肠杆菌O157∶H7菌株引起的出血性肠炎及溶血性尿毒症综合征[J];中国危重病急救医学;1996年10期

8 井良义,于风太,刘军,杨艳丽,李俊华,解晓华;天津地区环境样品中首次检出大肠杆菌O157∶H7[J];中国人兽共患病杂志;2003年05期

9 崔希;熊齐荣;熊勇华;山珊;赖卫华;;免疫磁分离结合胶体金免疫层析法快速检测大肠杆菌O157∶H7[J];分析化学;2013年12期

10 罗信昌,陈璋琴,张国江,蔡苏薇;从污水中检出O_(157)∶H7大肠杆菌[J];中国公共卫生;2001年01期

中国重要会议论文全文数据库 前6条

1 夏兴霞;王永山;孟祥升;朱国强;张雪寒;何孔旺;;大肠杆菌O157:H7单克隆抗体胶体金免疫层析检测试纸条的研制[A];中国畜牧兽医学会动物传染病学分会第十二次人兽共患病学术研讨会暨第六届第十四次教学专业委员会论文集[C];2012年

2 刘洁;夏兴霞;王永山;张雪寒;费荣梅;何孔旺;;大肠杆菌O157:H7抗体胶体金免疫层析检测试纸条的研制[A];中国畜牧兽医学会兽医公共卫生学分会第二次学术研讨会论文集[C];2010年

3 刘洁;夏兴霞;王永山;张雪寒;费荣梅;何孔旺;;大肠杆菌O157:H7抗体胶体金免疫层析检测试纸条的研制[A];中国畜牧兽医学会动物传染病学分会第四次猪病防控学术研讨会论文集[C];2010年

4 陈雅君;段志刚;魏战勇;王亚宾;崔保安;张龙现;陈丽颖;胡慧;;动物源大肠杆菌O157，

本文编号：875203