天然免疫受体TLRs和NLRs家族在长期培养hUC-MSCs中的表达谱分析

发布时间：2017-09-20 00:22

  本文关键词：天然免疫受体TLRs和NLRs家族在长期培养hUC-MSCs中的表达谱分析

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【摘要】：目的：检测分析体外长期培养hUC-MSCs前后的天然免疫受体TLRs和NLRs家族表达情况，探讨传代培养对hUC-MSCs炎症反应特征和免疫调节功能以及增殖、分化、迁移能力的影响，为改进hUC-MSCs培养扩增的质量与提高hUC-MSCs在实验和临床应用中的安全性积累实验资料。 方法：无菌收集剖宫产新生儿脐带，用胶原酶II消化结合贴壁选择分离纯化hUC-MSCs，流式细胞术结合诱导分化鉴定长期培养前后的hUC-MSCs（3、28代）；按Bustin S A等推荐标准设计、验证33个TLRs和NLRs家族的PCR引物； RT-qPCR检测长期培养前后（3、28代）hUC-MSCs的TLRs和NLRs家族成员的基因表达情况。 结果：流式细胞术分析结合诱导分化显示长期培养前后（3、28代）hUC-MSCs细胞表型均为CD29+/CD44+/CD105+/CD31-/CD34-/CD40-/CD45-/CD106-/HLA-DR，均能被诱导成为成骨和脂肪细胞，符合MSCs基本特征；设计的33对TLRs和NLRs家族成员基因引物经PCR产物测序后，扩增产物与目的基因靶部位的碱基序列基本一致，引物具有特异性；TLRs家族成员在hUC-MSCs中均有表达，且TLR1、TLR3和TLR6高表达，TLR2、TLR4、TLR5和TLR10中表达，TLR7、TLR8和TLR9低表达，第3代与28代比较，TLRs中除TLR2、TLR3mRNA表达量上升、TLR7mRNA表达量基本不变外，其余成员mRNA表达量均有所下降，其中TLR3mRNA表达差异有统计学意义（P0.05）；NLRs家族成员在hUC-MSCs中也均有表达，且NOD1、NLRC4、NLRC5、NLRP1、NLRP3、NLRP10、NAIP、NLRX1和APAF1高表达，其余成员低表达； NLRs中除NLRP10mRNA表达量上升、NLRC5、NLRX1mRNA表达量基本不变外，其余成员mRNA表达量均有所下降，其中NLRP1mRNA表达差异有统计学意义（P0.05）。 结论：实验证实，，在常规条件下培养hUC-MSCs至28代，细胞仍具有MSCs的基本生物学表型，但细胞的增殖分化能力有所下降；hUC-MSCs表达所有33个TLRs和NLRs家族成员的基因，不同成员之间的基因表达量存在较大差异；在培养传代过程中，hUC-MSCs大多数TLRs和NLRs家族成员的基因表达呈下降趋势，部分基因表达水平增加、减少或无变化，提示体外传代培养对hUC-MSCs表达TLRs和NLRs家族成员的影响是多向性的。因TLRs和NLRs家族不同成员及其信号通路与细胞的增殖分化、炎症反应、免疫调节功能等作用机制密切相关，可能反应出长期培养对hUC-MSCs相关功能的影响，为hUC-MSCs的功能干预提供研究的靶标，为改善培养细胞质量，强化细胞功能指示方向。这些都必将有利于hUC-MSCs在组织工程和临床移植治疗中的应用。
【关键词】：人脐带间充质干细胞 长期培养 天然免疫受体 Toll样受体 NOD样受体 表达谱
【学位授予单位】：暨南大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2013
【分类号】：R392
【目录】：

• 摘要3-5
• Abstract5-7
• 目录7-9
• 前言9-15
• 第一章 人脐带间充质干细胞的分离、培养与生物活性鉴定15-24
• 引言15
• 1.1 实验材料15-16
• 1.2 实验方法16-19
• 1.3 实验结果19-22
• 1.4 讨论22-23
• 1.5 结论23-24
• 第二章 TLRs 和 NLRs 家族成员基因分析 PCR 引物的设计与质量鉴定24-48
• 引言24
• 2.1 实验材料24-26
• 2.2 实验方法26-28
• 2.3 实验结果28-47
• 2.4 讨论47
• 2.5 结论47-48
• 第三章 天然免疫受体 TLRs 和 NLRs 家族在长期培养 hUC-MSCs 中的表达谱分析48-63
• 引言48
• 3.1 实验材料48-49
• 3.2 实验方法49-53
• 3.3 实验结果53-60
• 3.4 讨论60-62
• 3.5 结论62-63
• 全文总结63-64
• 参考文献64-71
• 英文缩略词表71-72
• 在校期间发表论文72-73
• 致谢73

【参考文献】

中国期刊全文数据库 前4条

1 朱雅姝;赵春华;;间充质干细胞的免疫调节能力——临床治疗的希望[J];中国科学(C辑:生命科学);2009年08期

2 许超;廖继东;柳菁;毛文哲;李扬秋;;长期培养人脐带间充质干细胞的生物活性及其限制性[J];中国组织工程研究与临床康复;2011年10期

3 毛文哲;许超;李扬秋;陈少华;柳菁;刘俊;廖继东;;长期培养的人脐带间充质干细胞PCNA、IL-6、IL-11和galectin-3的表达[J];中国病理生理杂志;2012年06期

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本文编号：884803