与雪旺细胞共培养诱导脂肪来源干细胞向神经元样细胞分化的实验研究

发布时间：2017-09-21 22:11

  本文关键词：与雪旺细胞共培养诱导脂肪来源干细胞向神经元样细胞分化的实验研究

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【摘要】：目的探讨非接触共培养条件下,大鼠SCs对脂肪来源干细胞(adipose-derived stem cells,ADSCs)的诱导分化效应,为神经组织工程寻找理想种子细胞提供参考。方法取新生1~2 d SD大鼠双侧坐骨神经,酶消化法分离培养SCs,并行S-100免疫荧光染色鉴定。取成年雄性SD大鼠腹股沟和腹膜后脂肪组织,差速贴壁法纯化获得ADSCs并传代,流式细胞仪检测第3代细胞表型CD29、CD34、CD45、CD73、CD90和CD105。取原代SCs和第3代ADSCs按2∶1比例于Transwell共培养系统共培养(实验组),以单纯培养ADSCs作为对照组。倒置相差显微镜下观察细胞形态学改变,培养14 d流式细胞仪检测神经元特异性烯醇化酶(neuron-specific enolase,NSE)表达,免疫荧光染色观察微管相关蛋白2(microtubule-associated protein 2,MAP2)、神经元核蛋白(neuronal nuclei protein,Neu N)和胶质原纤维酸性蛋白(glial fibrillary acidic protein,GFAP)神经元特异性标志物表达情况,并计算阳性细胞率。结果成功分离培养ADSCs并能连续传代,流式细胞仪检测示其高表达CD29、CD90、CD73和CD105,低表达CD34和CD45。倒置相差显微镜下见,实验组共培养后原本呈梭形的ADSCs以胞核为中心收缩,胞体折光性增强,胞体伸出多个长而粗的突起;对照组ADSCs形态无显著变化。流式细胞仪及免疫荧光染色示,共培养后14 d实验组均表达神经元特异性标志物NSE、MAP2、Neu N、GFAP,且阳性细胞率显著高于对照组(P0.01)。结论 SCs与ADSCs非接触共培养,两者不仅能够共生,且SCs能显著促进ADSCs向神经元样细胞分化。
【作者单位】： 天津医科大学总医院骨科;军事医学科学院卫生装备研究所;武警后勤学院附属脑科医院脑系;
【关键词】： 神经组织工程 雪旺细胞 脂肪来源干细胞 共培养 诱导分化 大鼠
【基金】：国家自然科学基金青年基金资助项目(81101362;11102235)~~
【分类号】：R329
【正文快照】： 神经损伤修复是医学领域难题,组织工程技术为其提供了新思路,如何大量获取神经元成为组织工程技术治疗神经系统疾病的关键[1]。Woodbury等[2]首先利用β-巯基乙醇、DMSO和丁基羟基苯甲醚作为神经诱导培养基诱导BMSCs分化为神经元样细胞,但分化后的细胞不够稳定,约6 d后开始死

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