重组蛋白PTD-HSP27的制备及其穿细胞膜和角膜组织的功能研究

发布时间：2017-09-22 18:00

  本文关键词：重组蛋白PTD-HSP27的制备及其穿细胞膜和角膜组织的功能研究

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【摘要】：目的:制备PTD-HSP27蛋白并研究其能否穿过人晶状体上皮细胞SRA01/04细胞膜及新西兰大白兔的角膜组织进入眼前房。方法:利用重叠延伸PCR法获得重组目的基因片段PTD-HSPB1-6His,构建重组质粒p KYB-PTD-HSP27-6His,原核诱导PTD-HSP27蛋白表达及纯化重组蛋白后对其进行Western blotting鉴定;用异硫氰酸荧光素(FITC)标记重组蛋白PTD-HSP27并检测其穿透SRA01/04细胞膜的能力及兔眼角膜组织的能力。结果:成功构建并纯化制备目的蛋白PTD-HSP27,在PTD-HSP27孵育后的SRA01/04细胞及结膜囊滴注PTDHSP27兔眼前房内均可检测出重组蛋白PTD-HSP27。结论:通过重叠延伸PCR法及镍柱层析纯化法可以获得较纯的重组蛋白PTD-HSP27;重组蛋白PTD-HSP27能够穿透SRA01/04细胞膜及穿越兔眼角膜进入房水。
【作者单位】： 暨南大学附属第一医院眼科;暨南大学生物工程研究所;
【关键词】： 蛋白转导域 热休克蛋白 反式转录激活因子 晶状体上皮细胞
【基金】：国家重点基础研究发展计划(973计划)(No.2011CB707501) 广东省自然科学基金资助项目(No.S2013010016037)
【分类号】：R363
【正文快照】： 热休克蛋白27(heat shock protein 27,HSP27)的低分子量使其隶属于小分子热休克蛋白家族,是由生物体(或离体培养细胞)在不良环境因素刺激下产生的一组应激蛋白,它在结构上具有高度的保守性,对于细胞的结构维持、更新和修复等方面起到十分重要的保护细胞作用。反式转录激活因子

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本文编号：902244