尖吻蝮蛇毒抑瘤组分Ⅰ对A549细胞及VEC细胞增殖和凋亡的影响

发布时间：2017-09-22 19:03

  本文关键词：尖吻蝮蛇毒抑瘤组分Ⅰ对A549细胞及VEC细胞增殖和凋亡的影响

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【摘要】：目的：研究尖吻蝮蛇毒抑瘤组分Ⅰ（AAVC-Ⅰ）对人肺腺癌A549细胞和血管内皮细胞（VEC）增殖及其凋亡的影响 方法：以A549细胞株及VEC细胞为研究对象，VEC来源于新生儿脐带采用酶消化法分离获得并用第Ⅷ因子相关抗原的免疫组化法对细胞进行鉴定。实验分为正常对照组和AAVC-Ⅰ干预组（AAVC-Ⅰ浓度梯度为：2.5、5、10、20、40μg/ml），观察不同浓度AAVC-Ⅰ对细胞作用的结果。MTT法检测AAVC-Ⅰ对细胞增殖的抑制率（分为12h、24h、48h）；HE染色法、AO/EB荧光染色法、Hoechst33258荧光染色法观察AAVC-Ⅰ作用后细胞的形态学变化情况；流式细胞术（FCM）检测AAVC-Ⅰ作用后细胞凋亡情况；免疫组化的方法检测AAVC-Ⅰ作用后bax及caspase-3蛋白表达情况。 结果：VEC分离提出后从形态学方面观察，细胞呈单层贴壁生长，6-8天铺满瓶底80%，呈典型的鹅卵石或铺路石状，可传代。第Ⅷ因子免疫组织化学染色法鉴定，胞浆可见棕黄色颗粒，证实为血管内皮细胞，取三代以后的细胞进行实验。 MTT结果显示：随着药物浓度的增加（2.5μg/ml-40μg/ml）及时间的延长（12h、24h、48h），两种细胞增殖抑制率亦随之升高，呈时间-剂量依赖性。 染色结果：HE染色后两种细胞对照组细胞轮廓清晰，边界清楚，胞核被苏木素染成蓝色，胞浆被伊红染成不同程度的粉色或桃红色，24h药物组细胞可见细胞体积缩小，核染色质深染，胞质致密，形成致密质块，可见凋亡小体。AO/EB染色后两种细胞对照组可见均匀绿色荧光，结构清楚，边界清晰，24h药物组中早期凋亡细胞呈绿色荧光，核固缩状，晚期凋亡细胞可见橘红色荧光，核固缩状，坏死细胞呈橘红色荧光。Hoechst33258染色后，两种细胞对照组细胞呈均匀蓝色，色泽清晰，边界清楚，24h药物组可见细胞染色质固缩，细胞核成致密浓染，或呈碎块状致密浓染，颜色有些发白。 流式细胞术结果显示：药物作用24h后，随着药物浓度的增加，A549细胞凋亡率从0.64%升高到70.97%；VEC细胞凋亡率从0.47%升高到78.81% 免疫组化结果显示：与对照组相比，药物组细胞浆可见棕黄色颗粒，随着药物浓度和时间的增加，，两种细胞平均光密度值也随之增加，呈时间-剂量依赖性。 结论：1.AAVC-Ⅰ能抑制A549细胞及VEC细胞增殖。 2.AAVC-Ⅰ能诱导A549细胞及VEC细胞凋亡 3.AAVC-Ⅰ对A549细胞及VEC细胞的促凋亡作用可能与细胞bax及caspase-3蛋白高表达有关。
【关键词】：AAVC-Ⅰ A549 VEC 细胞凋亡 bax
【学位授予单位】：皖南医学院
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2014
【分类号】：R363
【目录】：

• 中英文缩略词对照表5-9
• 摘要9-11
• Abstract11-13
• 前言13-16
• 第一部分 AAVC-I 对 A549 细胞增殖及凋亡的影响16-34
• 材料（资料、内容）与方法16-22
• 0. 研究内容16
• 1. 材料与方法16-21
• 1.1. 材料16-18
• 1.1.1. 主要试剂16-17
• 1.1.2. 其它试剂及配制17
• 1.1.3. 主要仪器和设备17-18
• 1.1.4. 细胞株18
• 1.2. 方法18-21
• 2. 统计学处理21-22
• 结果22-31
• 讨论31-34
• 第二部分 AAVC-I 对 VEC 细胞增殖及凋亡的影响34-52
• 研究材料（资料、内容）与方法34-41
• 0. 研究内容34
• 1. 材料与方法34-40
• 1.1. 材料34-36
• 1.1.1. 主要试剂34-35
• 1.1.2. 其它试剂及配制35
• 1.1.3. 主要仪器和设备35-36
• 1.1.4. 脐带标本36
• 1.2. 方法36-40
• 2. 统计学处理40-41
• 结果41-49
• 讨论49-52
• 结论52-53
• 参考文献53-57
• 综述57-66
• 参考文献62-66
• 附录66-67
• 作者简介及读研期间主要科研成果67-68
• 致谢68

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本文编号：902521