人脐带血造血干细胞体外分化为NK细胞的效率及功能检测

发布时间：2017-09-23 07:11

  本文关键词：人脐带血造血干细胞体外分化为NK细胞的效率及功能检测

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【摘要】：目的检测人脐带血造血干细胞(HSCs)体外分化为自然杀伤(NK)细胞的效率及功能。方法从人脐带血中分离CD34+HSCs,接种于含20μg/L FMS样酪氨酸激酶3配体(Flt3L)、干细胞生长因子(SCF)、白细胞介素(IL)-7、IL-15及IL-21的SCGM培养基中,定向诱导CD34+HSCs分化为NK细胞。观察细胞生长状态,在分化的第7、14、21及28天,采用流式细胞术检测各阶段CD56、NKG2D、NKp46、CD3、CD19及CD34等细胞免疫表型的表达变化;分化的第21、28天,以分化得到细胞为效应细胞,K562细胞作为靶细胞,设置8∶1、4∶1、2∶1和1∶1 4组效靶细胞比,分别采用乳酸脱氢酶(LDH)细胞毒性检测法和7AAD/CFSE标记法,检测分化得到的细胞杀伤功能。结果脐带血来源的CD34+HSCs在体外适宜的条件下可大量增殖;整个分化进程的不同阶段中,CD3和CD19表达量差异无统计学意义,CD56、NKG2D及NKp46的表达量逐渐增加,最高达(72.57±1.60)%、(32.83±1.29)%和(29.53±2.40)%,CD34的表达量逐渐降低,最低为(12.13±2.01)%。LDH毒性检测法和7AAD/CFSE标记法测得最大杀伤效率可达(49.91±2.76)%和(40.87±1.12)%,8∶1、4∶1、2∶1和1∶1组NK细胞杀伤能力均依次降低(P0.05),诱导分化28 d的NK细胞杀伤能力与21 d差异无统计学意义。结论人脐带血HSCs在体外适宜的培养条件下,可定向分化为NK细胞,诱导分化得到的NK细胞具有杀伤功能。
【作者单位】： 天津医科大学基础医学院药理学教研室;天津医科大学细胞生物学系;
【关键词】： 胎血 造血干细胞 杀伤细胞 天然 免疫表型分型 细胞毒性试验 免疫 CD+HSCs 体外分化 细胞杀伤
【基金】：973国家重大科学研究计划资助项目(2014CB910104) 国家自然科学基金资助项目(81171899)
【分类号】：R329.2
【正文快照】： 脐带血(UCB)中富含造血干细胞(HSCs),是除骨髓和外周血之外的第3种HSCs的重要来源[1]。在适宜的条件下,HSCs可以在体内和体外分化为自然杀伤(NK)细胞[2]。随着细胞免疫治疗的兴起,NK细胞越来越为人们所重视。由于人体自身NK细胞数量有限,而且在NK细胞不同发育阶段,甚至同一发

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本文编号：903887