Necrostatin-1对脑外伤后自噬及凋亡的影响

发布时间：2017-09-24 23:45

  本文关键词：Necrostatin-1对脑外伤后自噬及凋亡的影响

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【摘要】：目的：在小鼠脑外伤模型上研究程序性坏死特异性抑制剂necrostatin-1对脑外伤导致的自噬、凋亡、组织损伤和神经功能损害的影响。 方法：采用改良的自由落体装置，建立成熟雄性小鼠定量脑外伤(traumatic braininjury, TBI)模型。在脑外伤前通过单侧侧脑室注射Necrostatin-1(NEC-1)给药，并在伤后不同时间分别于处死前1h腹腔注射碘化丙啶(propidium iodide, PI)，采用体视学显微镜观察并计数各组损伤及其周边区(皮质与海马)PI阳性细胞数量。为了进一步确证PI阳性细胞能否代表脑外伤引起的细胞死亡和丢失，我们利用组织缺损体积(lesion volume, LV)对TBI后脑组织损伤程度进行评估；同时利用行为学试验(Motor Test和Morris水迷宫试验)评估TBI后各组小鼠的运动和学习记忆的情况，以探究脑外伤导致的组织学损伤能否导致神经功能损害。为了进一步探究NEC-1是否能够影响脑外伤后自噬和凋亡的活性，我们利用免疫印记法分别检测了自噬活性相关蛋白(Beclin-1，LC3，，P62)和凋亡活性相关(Bcl-2，caspase-3)的表达水平。同时为了进一步确证NEC-1对脑外伤后自噬和凋亡活性的影响，我们也利用了自噬及凋亡的抑制剂(3MA，Z-VAD)联合NEC-1检测了caspase-3和LC3-II的表达。 结果：NEC-1减少了TBI引起的细胞丢失数量、组织缺损体积，并降低了TBI后造成的神经功能损害程度。免疫印迹结果表明NEC-1能够降低TBI后自噬相关蛋白Beclin-1、LC3-II的表达和凋亡相关蛋白Bcl-2、caspase-3的活性。联合使用3MA和Z-VAD进一步证实了NEC-1的作用，并且表明在TBI后24小时3MA可以同时降低LC3-II和caspase-3的表达，而Z-VAD只降低了caspase-3表达却增加了LC3-II的转化。 结论：NEC-1能够抑制TBI引起的自噬和凋亡活性上调，并且NEC-1对于自噬和凋亡的影响机制可能参与了TBI后组织病理损害和功能障碍的修复过程。
【关键词】：脑外伤 自噬 凋亡 necrostatin-1 程序性坏死
【学位授予单位】：苏州大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2013
【分类号】：R363
【目录】：

• 中文摘要4-5
• Abstract5-9
• 前言9-14
• 第一部分 Necrostatin-1 对小鼠 TBI 后脑组织形态学及行为学表现的研究14-25
• 第一节 PI 阳性细胞的时程变化14-17
• 材料和方法14-16
• 结果16-17
• 第二节 苏木精染色测量脑缺损体积(lesion volume, LV)17-20
• 材料与方法17-19
• 结果19-20
• 第三节 行为学实验检测运动及学习记忆功能20-24
• 材料与方法20-22
• 结果22-24
• 小结24-25
• 第二部分 Necrostatin-1 对小鼠 TBI 后自噬及凋亡活性的影响及作用机制25-36
• 第一节 Necrostatin-1 对脑外伤后自噬和凋亡相关蛋白表达的影响25-33
• 材料与方法25-29
• 结果29-33
• 第二节 联合使用自噬及凋亡抑制剂探讨不同死亡方式间的相互作用33-35
• 材料与方法33-34
• 结果34-35
• 小结35-36
• 讨论36-40
• 结论40-41
• 参考文献41-47
• 展望47-48
• 综述48-60
• 参考文献54-60
• 缩略词60-61
• 本课题资助项目61-62
• 攻读硕士学位期间发表的论文62-63
• 致谢63-64

【参考文献】

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1 陶陆阳,陈溪萍,卞士中,丁梅,官大威,王继红;大鼠不同程度脑挫伤后caspase-3表达的研究[J];法医学杂志;2004年01期

本文编号：914170