AIPC细胞模型建立及LSD1在AI表型转化中的作用机制

发布时间：2017-09-26 09:09

  本文关键词：AIPC细胞模型建立及LSD1在AI表型转化中的作用机制

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【摘要】：目的:建立雄激素非依赖性前列腺癌LNCaP-AI细胞模型，初步探讨LSD1在前列腺癌获得AI表型中的作用机制。 方法:LNCaP细胞在含10%活性炭/葡聚糖处理的胎牛血清的无酚红RPMI1640培养基中连续培养3个月。在此期间，动态观察细胞生长变化。CCK-8法检测LNCaP-AI与LNCaP细胞增殖情况。RT-PCR检测LNCaP-AI细胞与LNCaP细胞中基因AR、前列腺特异性抗原（prostate-specificantigen,PSA）、LSD1、p53、p21、Bax、Bcl-2转录水平差异。WesternBlot检测LNCaP-AI细胞与LNCaP细胞中的基因AR、PSA、LSD1、p53、p21、Bax、Bcl-2蛋白表达水平差异。ELISA法分析LNCaP-AI细胞与LNCaP细胞分泌蛋白PSA的能力。免疫共沉淀法（Co-Immunoprecipitation,Co-IP）分析LNCaP-AI细胞中LSD1与AR、p53的相互作用。 结果:在去雄激素诱导过程中，LNCaP细胞生长受到抑制并出现神经内分泌样状态。经过3个月，LNCaP细胞摆脱了神经内分泌样状态并恢复快速增殖。CCK-8证实LNCaP-AI细胞在去雄激素培养基中能够快速生长，，而LNCaP细胞生长受到持续抑制。RT-PCR与WesternBlot表明，与LNCaP细胞相比，LNCaP-AI细胞中基因PSA表达明显下调而基因AR表达上调。ELISA显示，LNCaP-AI细胞群落在去雄激素培养基中分泌PSA总量明显高于LNCaP细胞群落。RT-PCR与WesternBlot分析表明，与LNCaP细胞相比，LNCaP-AI细胞中基因LSD1表达明显上调。Co-IP分析提示，LNCaP-AI细胞中存在LSD1与AR、p53的直接相互作用。进一步用RT-PCR与WesternBlot分析显示，与LNCaP细胞相比，LNCaP-AI细胞中基因p53、p21、Bax表达明显下调，而基因Bcl-2表达显著增加。 结论:对LNCaP细胞进行3个月的去雄激素诱导，获得AIPC细胞模型。雄激素非依赖性与依赖性前列腺癌中，LSD1表达存在明显差异。在去雄激素条件下，LSD1表达上调：一方面可能通过活化AR通路，促进前列腺癌细胞适应去雄激素条件；另外，可能通过抑制p53凋亡通路促进前列腺癌细胞抵抗去雄激素性凋亡而存活。LSD1可能通过正调控AR通路和负调控P53通路而在前列腺癌AI表型转化中发挥重要作用。
【关键词】：前列腺癌 雄激素非依赖性（AI） 赖氨酸特异性去甲基化酶1（LSD1） 激素受体（AR） p53
【学位授予单位】：华中科技大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2013
【分类号】：R329.2
【目录】：

• 主要缩略词表5-6
• 前言6-7
• 摘要7-9
• Abstract9-11
• 引言11-13
• 材料与方法13-27
• 结果27-33
• 讨论33-38
• 结论38-39
• 参考文献39-44
• 综述44-56
• [参考文献]51-56
• 致谢56

【共引文献】

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本文编号：922601