胶霉毒素诱导支气管上皮细胞凋亡及对相关凋亡基因、凋亡蛋白表达的影响

发布时间：2017-09-28 01:24

  本文关键词：胶霉毒素诱导支气管上皮细胞凋亡及对相关凋亡基因、凋亡蛋白表达的影响

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【摘要】：目的：通过烟曲霉感染人支气管上皮细胞体外模型，观察细胞培养上清液胶霉毒素水平和人支气管上皮细胞的相关凋亡基因、凋亡蛋白及凋亡率的改变来探讨胶霉毒素在人支气管上皮细胞烟曲霉感染中的作用及其机制。 方法：（1）菌株的培养：将烟曲霉菌接种到PDA琼脂平板，置于30℃培养箱内培养3-4天，连续活化两次，PBS重悬孢子并计数。（2）野生型人支气管上皮细胞（HBE）的培养：将支气管上皮细胞以密度为106/ml接种于直径10cm培养皿中，每皿加入5ml细胞悬液，再加入新鲜含10%FBS培养液后放入CO2培养箱中培养48h。（3）共培养模型的建立：当细胞密度为80%以上时，，按1:1000（菌孢子数:支气管上皮细胞数）加入菌悬液，37℃、5%CO2条件下培养3h，PBS冲洗，弃上清液，加入一定量的RPMI1640完全培养基，置于细胞培养箱中，继续培养。（4）结果的测定：分别于共培养12h、24h、36h终止实验，收集细胞培养上清液和支气管上皮细胞，采用液相色谱-串联质谱法（LC-MS）、RealTime-PCR、Wester-Blot和流式细胞仪（Annexin V-FITC法）技术，检测各共培养模型中上清液胶霉毒素的水平及支气管上皮细胞相关凋亡基因、凋亡蛋白的变化及凋亡率。 结果： 1.液相色谱-串联质谱法（LC-MS）测定胶霉毒素水平结果显示：与对照组（共培养模型0h时间点，烟曲霉呈孢子状态）相比，AF293共培养组及AF B5233WT共培养组上清液胶霉毒素水平随时间逐渐升高（P0.05）；AF B5233ΔGlip共培养细胞培养上清液组未检测到胶霉毒素。AF293单独培养组及AF293支气管上皮细胞共培养组上清液胶霉毒素水平随时间逐渐升高（P0.05），在36h时间点AF293支气管上皮细胞共培养组胶霉毒素水平高于AF293单独培养组，有统计学差异（P0.05）。 2. RT-PCR检测支气管上皮细胞相关凋亡基因结果显示：与对照组（共培养模型0h时间点，烟曲霉呈孢子状态）相比，各共培养组细胞bcl-2凋亡基因表达水平呈逐渐降低（P0.05），Bak凋亡基因表达水平呈逐渐升高（P0.05）；将AFB5233ΔGlip共培养组分别与AF293共培养组及AF B5233WT共培养比较，在36h时间点凋亡基因bcl-2、bak表达水平均有统计学差异（P0.005）。 3. Wester-Blot检测支气管上皮细胞凋亡蛋白结果显示：与对照组（共培养模型0h时间点，烟曲霉呈孢子状态）相比，各共培养组细胞bcl-2凋亡蛋白合成水平呈逐渐降低（P0.05），Bak凋亡蛋白合成水平呈逐渐升高（P0.05）；将AFB5233ΔGlip共培养组分别与AF293共培养组及AF B5233WT共培养比较，在36h时间点凋亡蛋白bcl-2、bak合成水平均有统计学差异（P0.005）。 4.流式细胞仪检测支气管上皮细胞凋亡率结果显示：与对照组（共培养模型0h时间点，烟曲霉呈孢子状态）相比，各共培养组细胞凋亡率呈逐渐升高（P0.05）；将AF B5233ΔGlip共培养组分别与AF293共培养组及AF B5233WT共培养比较，在36h时间点细胞凋亡率均有统计学差异（P0.005）。 结论： 1.胶霉毒素在支气管上皮细胞烟曲霉感染过程中发挥着重要作用。 2.胶霉毒素可诱导支气管上皮细胞凋亡，且Bak、Bcl-2可能是胶霉毒素在支气 管上皮细胞烟曲霉感染过程中发挥作用的重要位点。 3.支气管上皮细胞烟曲霉感染过程中烟曲霉可能分泌了除胶霉毒素外的其他毒素参与致病过程。 4.支气管上皮细胞可能会刺激烟曲霉分泌更多的胶霉毒素。
【关键词】：烟曲霉 胶霉毒素 人支气管上皮细胞 凋亡
【学位授予单位】：福建医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2014
【分类号】：R379
【目录】：

• 中文摘要4-6
• Abstract6-8
• 引言8-12
• 材料和方法12-15
• 试验方法15-22
• 统计学处理22-23
• 结果23-35
• 讨论35-39
• 结论39-40
• 参考文献40-45
• 文献综述45-50
• 参考文献48-50
• 致谢50

【参考文献】

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1 朱浩翔,张永信;免疫缺陷者侵袭性肺曲菌病的研究进展[J];国外医药(抗生素分册);2004年04期

本文编号：933039