铜绿假单胞菌外膜蛋白H原核表达、多克隆抗体制备及免疫保护作用

发布时间：2017-09-28 09:01

  本文关键词：铜绿假单胞菌外膜蛋白H原核表达、多克隆抗体制备及免疫保护作用

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【摘要】：目的为铜绿假单胞菌外膜蛋白H(OprH)工业发酵与疫苗开发研究奠定基础。方法采用分子克隆技术构建OprH蛋白的表达菌株,通过正交试验设计筛选OprH菌株的最佳培养条件与表达条件。利用切胶纯化获得OprH蛋白并免疫小鼠,制备OprH蛋白多克隆抗体,采用ELISA法检测抗体滴度,蛋白质印迹法检测抗血清特异性;对小鼠免疫OprH蛋白,攻毒铜绿假单胞菌,检测蛋白的免疫保护作用。结果 OprH重组载体双酶切、DNA测序鉴定结果,以及蛋白表达、纯化条带大小与预测一致。OprH菌株最佳培养条件为转速230r/min,葡萄糖浓度0%,装液量50mL;最佳诱导表达条件为异丙基-β-D-硫代半乳糖苷终浓度0.3mmol/L,诱导时菌液D600值0.8,温度32℃,诱导时间3h。ELISA法获得OprH抗血清滴度达1∶1 600,蛋白质印迹法证实抗血清具有很好的特异性。OprH免疫小鼠激活的特异性免疫对小鼠铜绿假单胞菌感染的保护率达到46.15%,与对照相比较差异有统计学意义(P0.05)。结论成功构建OprH表达载体,纯化获得OprH蛋白,制备OprH蛋白多克隆抗体,实验结果表明OprH蛋白对小鼠铜绿假单胞菌感染具有免疫保护作用,并获得OprH蛋白菌株的最佳培养条件与表达条件。
【作者单位】： 陕西理工学院生物科学与工程学院生物化学与分子生物学教研室;
【关键词】： 铜绿假单胞菌 外膜蛋白H 正交试验 多克隆抗体
【基金】：陕西省教育厅科学研究计划(2013JK0723)~~
【分类号】：R392
【正文快照】： 铜绿假单胞菌(Pseudomonas aeruginosa),又称绿脓杆菌,是一种条件致病菌,在正常人的皮肤、呼吸道和肠道等均有此菌存在,是医院内感染的主要病原菌之一。当机体抵抗力下降、重大疾病创伤、免疫缺陷以及烧伤后极易诱发感染,严重时可导致威胁生命的感染性休克[1]。目前,该菌感染

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本文编号：934935