携Apoptin和PEG3启动子双特异性重组腺病毒的构建及鉴定

发布时间：2017-09-28 13:42

  本文关键词：携Apoptin和PEG3启动子双特异性重组腺病毒的构建及鉴定

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【摘要】：目的利用凋亡素基因(Apoptin)和进行性增量基因3(progression-elevated genes 3,PEG3)构建具有特异性杀伤和特异性复制功能的双特异性溶瘤腺病毒Ad-Apoptin-PEG3p-E1a,为研究Ad-Apoptin-PEG3p-E1a的抗肿瘤作用奠定基础。方法从pMT-E1a和pIRES-neo获得目的基因E1a和PolyA并连接入pKS-PEG3p,用XhoⅠ和SpeⅠ双酶切后连接入pAd-Apoptin,获得穿梭载体pacAd-Apoptin-PEG3p-E1a。用pacAd-Apoptin-PEG3p-E1a和腺病毒骨架质粒(pAd5)共转染HEK293细胞,获得重组腺病毒Ad-Apoptin-PEG3p-E1a,利用RT-PCR、Western blot和电镜对重组病毒进行鉴定,采用MTS检测病毒对A549细胞的抑制效果及其对L02细胞的影响;通过绘制一步生长曲线,检测重组毒在细胞内的复制情况。结果构建的重组病毒基因组中含有Apoptin目的基因,电镜下具有正常形态。MTS检测重组腺病毒对A549细胞的抑制作用具有时效和量效关系(P0.05),抑制作用在100MOI、96h时达峰值为(79.84±1.0)%,对正常细胞L02无显著影响,该双特异性重组腺病毒能够在A549肿瘤细胞内复制,在L02细胞内几乎无复制能力。结论成功包装重组腺病毒Ad-Apoptin-PEG3p-E1a,且该病毒具有肿瘤特异性杀伤和肿瘤特异性复制功能。
【作者单位】： 延边大学医学院;军事医学科学院军事兽医研究所;吉林省人兽共患病预防与控制重点实验室;
【关键词】： 重组腺病毒 Apoptin 进行性增量基因 特异性 抗肿瘤
【分类号】：R373
【正文快照】： 腺病毒(adenovirus,Adv)是一种无囊膜的双链DNA病毒,基因组大小约为36kb[1]。迄今为止,已发现的人腺病毒有100多种血清型,其中用于人类肿瘤基因治疗的多为人5型腺病毒。基因治疗因可逆转肿瘤细胞表型或诱导细胞自我毁灭而备受关注,病毒疗法为其中的主要领域[2-3]。RAPAd.Ⅰ腺

【参考文献】

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【共引文献】

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本文编号：936177