人偏肺病毒多表位抗原的构建与表达

发布时间：2017-09-28 15:12

  本文关键词：人偏肺病毒多表位抗原的构建与表达

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【摘要】：目的构建含人偏肺病毒(h MPV)B细胞和T细胞表位的多表位抗原,并在原核系统表达,评价其免疫原性和免疫反应性。方法以人偏肺病毒NL/1/00不同蛋白为模板,采用在线生物信息学软件Bepipred、ABCpred、Bcepred、LEPS及LBTOPE预测B细胞表位,以Net MHCpan及Net MHC预测CTL细胞表位,以Net MHCⅡ预测Th细胞表位。综合各软件预测结果,确定候选B细胞及T细胞表位,各表位间加入间隔序列"GPGPG"和"KK",串联为多表位抗原基因mea,与p ET32a(+)连接后转化E.coli BL21(DE3)宿主菌,经含氨苄的LB平板培养基筛选、鉴定获得重组p ET32a(+)-mea,经IPTG诱导表达获得多表位抗原(MEA),以镍层析柱纯化,以Western blot鉴定表达蛋白,以MEA免疫小鼠,以ELISA法检测产生抗体效价,以间接免疫荧光法(IFA)检测抗体特异性。结果共预测筛选人偏肺病毒B细胞表位6个,CTL表位4个,Th细胞表位2个,串联为多表位抗原基因mea,经与p ET32a(+)重组后,转化E.coli BL21(DE3)宿主菌,经IPTG 30℃诱导5 h,上清及沉淀均有目的蛋白表达。上清经镍层析柱纯化后获得重组多表位抗原MEA,浓度为1 mg/ml。Western blot检测显示,表达的MEA可与抗His抗体结合。经MEA免疫的BALB/c小鼠的抗血清经ELISA检测,抗体效价达105以上;经间接免疫荧光检测,抗血清能与感染vero-E6细胞的h MPV结合。结论成功构建了h MPV多表位抗原基因,并在原核系统成功表达,获得多表位抗原MEA。该抗原具有很好的免疫原性和免疫反应性,并可与h MPV病毒发生结合,具有病毒特异性。
【作者单位】： 天津市疾病预防控制中心病原生物检测所;天津医科大学基础医学院;
【关键词】： 人偏肺病毒 B细胞表位 T细胞表位 多表位抗原
【基金】：中国博士后科学基金(2013M541186) 天津市自然科学基金(15JCYBJC24700) 天津市卫生计生委科技基金(2013KY20)
【分类号】：R392
【正文快照】： 急性呼吸道感染(acute respiratory tract infections,ARTIs)是人类发病和死亡的重要原因之一,也是引起世界范围内5岁以下儿童死亡的首要原因[1]。人偏肺病毒(human metapneumovirus,h MPV)是荷兰学者于2001年从呼吸道感染的婴幼儿鼻咽吸取物标本中分离到的一种新病毒,属于副，

本文编号：936541