湖北钉螺糖原浓度节律性变化和溶菌酶活力的研究

发布时间：2017-09-30 10:09

  本文关键词：湖北钉螺糖原浓度节律性变化和溶菌酶活力的研究

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【摘要】：第一部分 湖北钉螺糖原浓度的节律性变化研究 目的：探索湖北钉螺（Oncomelania hupensis）体内不同组织糖原浓度与季节、昼夜节律变化的关系。 方法：于2012年8月到2013年7月（2013年1月未采）每个月的月初，采集安徽芜湖青弋江滩上的钉螺，压碎螺壳，分离肝脏及头足部肌肉，用滤纸吸干组织外水分，收集肝、头足肌及整体软体组织并称重。用硫酸-蒽酮比色法分别测定湖北钉螺各月份雌、雄螺的肝、头足肌及整体软体组织的糖原浓度。2013年6月采集青弋江滩上的钉螺，收集24h内每隔2h的钉螺，按前述方法分别测定24h内每隔2h的整体软体组织糖原浓度（不分雌雄）。 结果：9月至次年的6月，整体软体组织和肝的糖原浓度逐月下降；6月份时雌性整体软体组织糖原浓度最低（0.55μg/mg），而雄性则在4月份降至全年最低值（0.88μg/mg），雌、雄螺整体软体组织年平均值分别为2.99μg/mg和3.39μg/mg。肝糖原浓度5月份最低（♀=0.29μg/mg，♂=0.22μg/mg），两者同时8月达到最高（♀=2.49μg/mg，♂=2.78μg/mg），雌、雄螺肝糖原浓度年平均值分别为1.09μg/mg和0.89μg/mg。头足肌糖原浓度从2月份到6月份逐月下降，6月份最低（♀=0.25μg/mg，♂=0.41μg/mg），12月份达到最高（♀=16.59μg/mg，♂=10.06μg/mg），雌、雄螺头足肌糖原浓度年平均值分别为7.99μg/mg和6.05μg/mg。整体软体组织糖原浓度与肝糖原浓度存在线性正相关关系（P＜0.05），且具有与肝糖原相似的月份变化规律。雌、雄螺的头足肌糖原浓度与整体软体组织和肝的糖原浓度呈线性正相关关系（P＜0.05），头足肌糖原与整体软体组织和肝糖原浓度变化规律有部分相同。湖北钉螺糖原24h内从2点开始到24点每隔2h的平均浓度分别为5.227±1.000、4.495±0.100、7.010±0.200、6.175±0.500、6.37±0.700、7.097±0.300、8.242±0.300、5.895±1.500、5.362±1.70、6.5075±0.200、6.220±0.010、6.792±1.4μg/mg，经单因素方差分析（F=3.763，P＜0.05），差异有统计学意义。 结论：湖北钉螺体内不同组织糖原浓度随着季节、昼夜节律变化而出现有规律的变化。 第二部分 湖北钉螺溶菌酶活力的初步研究 目的：探讨湖北钉螺体内溶菌酶活力、最适pH值、最适温度、抑菌效果、不同季节及不同螺龄钉螺体内溶菌酶活力差异。 方法：将钉螺软体组织匀浆后，采用浸提法用Tris-HCl-TritonX-114缓冲液浸提24h，10000×g离心10min；取上清，37℃水浴15min后，2000×g离心10min；取沉淀，置于超滤离心管中截留相对分子质量（Mr）=3000，在4℃下5000×g离心30min，使之浓缩，即得浓缩酶。采用二喹啉甲酸（BCA）法测定其蛋白质含量，浊度法测定溶菌酶的活力及溶菌酶的最适pH值、最适温度；琼脂扩散（K－B）法分别检查其抑菌作用。 结果：湖北钉螺体内存在溶菌酶，7月份成螺浓缩酶中蛋白质含量为3.428mg/ml，总活力为（1520±240）U，比活力为（221±35）U/mg。成螺体内浓缩酶液对底物溶壁微球菌的最适作用pH值为7.0，，最适温度为50℃，在35℃以上和60℃以下，pH5.0～8.0都有较好的稳定性；加入浓缩酶后，溶壁微球菌、痢疾志贺菌实验组出现抑菌圈，抑菌环直径平均分别为10～12、12～15mm，Tris-HCl-TritonX-114缓溶液阴性对照未见抑菌圈，金黄色葡萄球菌、大肠杆菌及白色念珠菌组均未见抑菌圈；春、夏、秋、冬季钉螺溶菌酶活力分别为（71.33±4.16）、（93.67±7.10）、（150.33±10.01）、（358±35.38） U/mg，冬季活力最高，差异有统计学意义（F=144.455，P＜0.01），成螺和幼螺溶菌酶活力分别为（93.67±7.10）U/mg和（69.33±5.03） U/mg，差异有统计学意义（t=4.845，P＜0.05）。 结论：缓冲液浸提法能从钉螺软体组织中分离出具有活力溶菌酶；钉螺溶菌酶最适作用pH值为7.0，最适温度为50℃；溶菌酶对溶壁微球菌、痢疾志贺菌有抑菌作用，而对金黄色葡萄球菌、大肠杆菌和白色念珠菌无抑菌作用；湖北钉螺成螺体内溶菌酶活力随季节变化而改变，成螺溶菌酶活力高于幼螺。
【关键词】：湖北钉螺 肝糖原 头足肌糖原 整体软体组织糖原 季节节律 昼夜节律 湖北钉螺 溶菌酶 酶活力 抑菌作用
【学位授予单位】：皖南医学院
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2014
【分类号】：R383.2
【目录】：

• 中文摘要9-12
• Abstract12-15
• 第一部分 湖北钉螺糖原浓度的节律性变化研究15-30
• 前言15-16
• 材料与方法16-19
• 1 材料16-17
• 1.1 实验钉螺16
• 1.2 主要试剂16
• 1.3 主要仪器16-17
• 2 方法17-19
• 2.1 软体组织获取17
• 2.2 糖原样品的制备17
• 2.3 0.2%硫酸-蒽酮试剂的配制17
• 2.4 葡萄糖标准曲线的制作17-18
• 2.5 糖原浓度测定18
• 2.6 统计学分析18-19
• 结果19-23
• 1 葡萄糖标准曲线19
• 2 湖北钉螺肝糖原浓度的季节变化19-20
• 3 湖北钉螺头足肌糖原浓度的季节变化20-21
• 4 湖北钉螺整体软体组织糖原浓度的季节变化21-22
• 5 湖北钉螺软体组织糖原浓度的昼夜节律变化22-23
• 讨论23-26
• 结论26-27
• 参考文献27-30
• 第二部分 湖北钉螺溶菌酶活力的初步研究30-50
• 前言30-31
• 材料与方法31-38
• 1 材料31-35
• 1.1 钉螺来源31
• 1.2 主要仪器31
• 1.3 主要试剂31
• 1.4 培养基及试剂的配制31-32
• 1.4.1 沙氏培养基配方31
• 1.4.2 溶壁微球菌培养基配方31-32
• 1.4.3 大肠杆菌培养基配方32
• 1.4.4 PBS 缓冲液32
• 1.4.5 Tis-HCl-Triton X-1142432
• 1.5 无菌滤纸片的制作32-35
• 2 方法35-38
• 2.1 软体组织的获取35
• 2.2 粗酶的制备35
• 2.3 浓缩酶的制备35
• 2.4 蛋白质标准曲线制作35-36
• 2.5 蛋白质含量的测定36
• 2.6 溶菌酶活力测定36
• 2.7 不同 pH 值下溶菌酶活力36-37
• 2.8 不同温度下溶菌酶活力37
• 2.9 抑菌实验37
• 2.10 统计学分析37-38
• 结果38-44
• 1 蛋白质标准曲线38
• 2 7 月份浓缩酶蛋白质含量38
• 3 7 月份浓缩酶中的溶菌酶活力38-39
• 4 7 月份浓缩酶中的溶菌酶抑菌实验39-41
• 5 pH 值变化对溶菌酶活力的影响41-42
• 6 温度变化对溶菌酶活力的影响42
• 7 不同季节成螺浓缩酶蛋白质含量42
• 8 不同季节钉螺成螺溶菌酶活力比较42-43
• 9 7 月份成、幼螺溶菌酶活力比较43-44
• 讨论44-46
• 结论46-47
• 参考文献47-50
• 综述 软体动物糖原的研究进展50-63
• 摘要50
• Abstract50
• 1 糖原在软体动物的分布50-51
• 2 影响软体动物糖原的因素51-52
• 3 软体动物糖原的意义52-53
• 4 软体动物糖原的结构53
• 5 糖原的代谢53-56
• 5.1 糖原合酶54-55
• 5.2 糖原磷酸化酶55-56
• 6 软体动物糖原的国内外研究现状56-58
• 参考文献58-63
• 附录63-76
• 作者简介及读研期间主要科研成果76-77
• 致谢77

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本文编号：947582