糖尿病并发抑郁症动物模型的建立及中药干预作用

发布时间：2017-10-01 13:07

  本文关键词：糖尿病并发抑郁症动物模型的建立及中药干预作用

  更多相关文章： 糖尿病并发抑郁症 动物模型 HPA轴紊乱 海马损伤 11β羟类固醇脱氢酶1 糖皮质激素受体 左归降糖解郁方

【摘要】：目的： 1.建立糖尿病并发抑郁症动物模型,从体表特征、行为学、血液学相关指标等不同维度确立模型评价体系,为糖尿病并发抑郁症的实验研究奠定基础。 2.以所建糖尿病并发抑郁症模型动物为研究对象,给予中药复方左归降糖解郁方干预,明确其降糖、调脂和抗抑郁作用,并探明其治疗糖尿病并发抑郁症的作用机理,为糖尿病并发抑郁症的防治提供新思路和新方法。 方法： 1.糖尿病并发抑郁症动物模型的建立。SD大鼠高脂灌胃2w后腹腔注射链脲佐菌素(38mg/kg),行为学随机分为2组,糖尿病组和糖尿病+慢性应激组；正常大鼠行为学随机分为2组,正常组和慢性应激组。慢性应激28天后,测定各组大鼠的体重,进行Open-field和Morris水迷宫行为学评价,生化法检测血糖、糖化血红蛋白、胰岛素水平、血脂含量；ELISA法测定血浆促肾上腺激素释放激素(CRH)、促’肾上腺皮质激素(ACTHX)、皮质酮(CORT)含量,HE染色观察各组大鼠海马、下丘脑、垂体和肾上腺的病理改变,免疫组化和Western-blotting方法检测各组大鼠海马糖皮质激素受体(GR)和11p羟类固醇脱氢酶1(Hβ-HSD1)蛋白的表达,RT-PCR方法检测其mRNA表达。 2.左归降糖解郁方的干预作用。采用方法1确定的糖尿病并发抑郁症建模方法复制动物模型,并随机分为5组,糖尿病并发抑郁症模型组,二甲双胍(1.8mg/kg)+百忧解(10.8mg/kg)组,左归降糖解郁方高、中、低剂量组,以正常组为对照。给药4周后,各组大鼠按照方法1指标进行检测。 结果： 1.与正常组比较,糖尿病模型+慢性应激组大鼠体重明显降低(P0.05); Open-field实验中活动总数明显减少(P0.05); Morris水迷宫实验中逃避潜伏期明显延长,空间探索时间明显缩短(P0.05)；血液生化指标中,血糖异常升高,糖化血红蛋白含量显著升高,胰岛素抵抗明显,胆固醇、甘油三酯、低密度脂蛋白胆固醇明显升高,高密度脂蛋白胆固醇明显降低(P0.05)；血浆CRH、ACTH、CORT明显升高(P0.05)；HE染色发现,其海马、下丘脑、垂体、肾上腺存在明显的病理改变；免疫组化和、(?)estern-blotting检测发现海马11β-HSD1蛋白表达明显升高,GR表达明显降低(P0.05); RT-PCR检测结果与Western-blotting保持一致。 2.与正常组比较,模型组大鼠各项指标均出现明显异常(P0.05)。与模型组比较,左归降糖解郁方高剂量组大鼠自主活动次数明显增多(P0.05),学习记忆能力得到一定程度恢复,血糖趋向稳定,胰岛素抵抗程度减轻,糖化血红蛋白、胆固醇、甘油三酯、低密度脂蛋白胆固醇水平显著降低(P0.05),高密度脂蛋白胆固醇水平显著升高(P0.05),血浆CRH、 ACTH、CORT水平明显降低(P0.05), HPA轴亢进缓和,海马、下丘脑、垂体、肾上腺病理改变减少,损伤程度减弱,海马11β-HSD1蛋白表达显著降低,、GR蛋白表达显著升高(P0.05)；而其中剂量和低剂量作用较弱。 结论： 1.结合糖尿病并发抑郁症的临床特征,采用Open-field实验,Morris水迷宫实验,血糖及糖化血红蛋白,胰岛素抵抗三项,血脂四项等指标可建立一套糖尿病并发抑郁症动物模型的评价体系。 2.采用14天高脂灌胃、小剂量链脲佐菌素(38mg/kg)注射及28天慢性应激的复合造模方法可成功制备糖尿病并发抑郁症动物模型。 3.糖尿病并发抑郁症大鼠下丘脑、垂体、肾上腺病理损伤严重,HPA轴分泌亢进加剧,皮质酮体内含量异常升高导致海马病理改变,而海马11p-HSD1表达上调,GR表达下调可能协同参与皮质酮损伤海马过程,并促进了糖尿病并发抑郁症的发生发展。 4左归降糖解郁方可稳定模型大鼠体重,改善其抑郁行为,降低血糖,调节血脂,缓和胰岛素抵抗和HPA轴分泌亢进,减少海马等组织的病理损伤,其治疗作用可能与升高海马GR表达,减少11β-HSD1表达有关,具有一定的疗效,值得进一步研究和开发。
【关键词】：糖尿病并发抑郁症 动物模型 HPA轴紊乱 海马损伤 11β羟类固醇脱氢酶1 糖皮质激素受体 左归降糖解郁方
【学位授予单位】：湖南中医药大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2013
【分类号】：R285.5;R-332;R259
【目录】：

• 英文缩略词表7-8
• 中文摘要8-11
• ABSTRACT11-15
• 引言15-18
• 第一部分 糖尿病并发抑郁症动物模型的建立18-52
• 1 实验材料18-20
• 1.1 主要试剂18-19
• 1.2 主要溶液与缓冲液19-20
• 1.3 主要仪器20
• 2 实验方法20-32
• 2.1 实验动物及分组20-21
• 2.2 模型的建立方法21
• 2.2.1 实验性糖尿病动物模型的建立21
• 2.2.2 慢性应激方法21
• 2.3 指标测定21-31
• 2.3.1 行为学实验21-22
• 2.3.2 血糖、血脂指标测定22-23
• 2.3.3 HPA轴内分泌相关指标测定23
• 2.3.4 组织病理学检测23-24
• 2.3.5 免疫组化检测24-25
• 2.3.6 海马11β-HSD1和GR的Western-blotting检测25-29
• 2.3.7 海马11β-HSD1和GR的RT-PCR检测29-31
• 2.4 统计学处理31-32
• 3 实验结果32-42
• 3.1 大鼠一般情况观察32
• 3.2 体质量变化情况32-33
• 3.3 Open-field实验33-34
• 3.4 Morris水迷宫实验34
• 3.5 血糖、血脂、胰岛素指标测定34-36
• 3.6 HPA轴内分泌相关指标测定36
• 3.7 组织病理检测36-39
• 3.7.1 海马形态学变化36-37
• 3.7.2 下丘脑形态学变化37
• 3.7.3 垂体形态学变化37-38
• 3.7.4 大鼠肾上腺形态学变化38
• 3.7.5 GR、11β-HSD1的免疫组化检测38-39
• 3.8 海马11β-HSD1和GR的Western-blotting检测39-40
• 3.9 海马11β-HSD1和GR的RT-PCR检测40-42
• 4 讨论42-52
• 4.1 DD动物建模方法的选择42-43
• 4.2 DD动物模型评价指标的确立43-46
• 4.2.1 糖尿病样指标评价44-45
• 4.2.2 抑郁样指标评价45-46
• 4.3 DD大鼠HPA轴功能紊乱致海马损伤机制的研究46-49
• 4.4 DD大鼠海马GR和11β-HSD1表达的变化49-52
• 第二部分 左归降糖解郁方对DD大鼠的干预作用52-66
• 1 实验材料52
• 1.1 主要试剂52
• 1.2 主要溶液与缓冲液52
• 1.3 主要仪器52
• 2 实验方法52-54
• 2.1 实验动物及分组52-53
• 2.2 糖尿病并发抑郁症动物模型的建立53
• 2.3 指标检测53
• 2.4 统计学处理53-54
• 3 实验结果54-62
• 3.1 体质量变化情况54
• 3.2 Open-field实验54-55
• 3.3 Morris水迷宫实验55-56
• 3.4 血糖、血脂、胰岛素指标测定56-57
• 3.5 HPA轴内分泌相关指标测定57
• 3.6 组织病理检测57-60
• 3.6.1 海马形态学变化57-58
• 3.6.2 下丘脑形态学变化58-59
• 3.6.3 垂体形态学变化59
• 3.6.4 大鼠肾上腺形态学变化59-60
• 3.7 GR、11β-HSD1的免疫组化检测60-61
• 3.8 11β-HSD1和GR的Western-blotting检测61-62
• 4 讨论62-66
• 4.1 左归降糖解郁方的组方原则及药物配伍意义62-64
• 4.2 左归降糖解郁方对DD大鼠的保护作用64-66
• 结论66-68
• 创新点68-70
• 不足之处及下一步研究方向70-71
• 致谢71-73
• 参考文献73-79
• 附录79-95
• 综述79-95
• 参考文献90-95
• 攻读硕士期间发表的论文95-96
• 攻读硕士期间参与的课题96-97
• 攻读硕士期间获得的奖励97

【参考文献】

中国期刊全文数据库 前10条

1 李红;郑姜钦;吕绍光;;解郁方治疗2型糖尿病抑郁症的临床观察[J];福建医科大学学报;2006年05期

2 梁志清,苏珂,唐灵,周燕;2型糖尿病伴发抑郁症患者下丘脑-垂体-肾上腺轴功能研究[J];华夏医学;2003年02期

3 张妍;徐桂芳;赵宝龙;陈淑雯;陈琴凤;;2型糖尿病合并抑郁症患者胰岛功能的变化研究[J];医学临床研究;2006年09期

4 向慧;徐寒松;杨世昌;;2型糖尿病患者抑郁状况调查[J];临床心身疾病杂志;2006年03期

5 张萌;肖万泽;;丹栀逍遥散加味治疗糖尿病伴抑郁症临床观察[J];辽宁中医药大学学报;2008年02期

6 李淑梅;马云霞;李丽芳;;老年2型糖尿病患者合并抑郁症的临床分析[J];宁夏医学杂志;2012年09期

7 唐莹;;2型糖尿病并发抑郁症的探讨及治疗[J];临床合理用药杂志;2010年03期

8 陈晓东;;十味忘忧汤治疗2型糖尿病合并抑郁症30例[J];山东中医杂志;2009年11期

9 黄晓萍;李红;姜维洁;;2型糖尿病伴抑郁障碍患者C反应蛋白和胰岛功能的变化[J];检验医学;2009年04期

10 万顺伦,廖茂瑶,郝如松,李召峰,孙刚;大鼠海马神经元内11β-HSD1和GR的共存及其意义[J];生理学报;2002年06期

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本文编号：953592