低频电磁场对小鼠毛发生长及KGF、β-catenin表达影响的研究

发布时间：2017-10-01 17:05

  本文关键词：低频电磁场对小鼠毛发生长及KGF、β-catenin表达影响的研究

  更多相关文章： 低频电磁场 毛发生长 角质化细胞生长因子 增殖

【摘要】：目的观察低频电磁场（Low Frequency Electromagnetic Field, LFEMF）对小鼠毛发生长的影响，同时观察此过程中LFEMF对K15阳性（K15+）干细胞及毛囊内细胞增殖的调控作用以及对角质化细胞生长因子（Keratinocyte Growth Factor）、β-catenin表达的影响，为解决毛囊及毛发再生提供新的治疗方法。 方法采用松香/蜡混合物脱毛法制作C57BL/6小鼠毛发生长模型，随机分为对照组及低频电磁场组（LFEMF组），每组18只。脱毛次日，LFEMF组采用50Hz、5mT磁场，每日30min，连续作用，并拍照记录体外毛发生长情况。分别在LFEMF干预3天、9天、16天后的次日，对两组小鼠体外毛发生长情况进行评分，然后留取两组小鼠脱毛处皮肤组织，进行HE染色观察两组毛囊形态差异并定量分析毛囊长度；分别提取各组全皮肤组织RNA和蛋白后，行荧光定量PCR检测KGF和β-catenin基因表达量，Western-blot检测KGF蛋白表达；最后，采用免疫荧光法分析KGF在毛囊内的表达位点、并定量分析增殖细胞（Ki67+细胞）及表皮干细胞（K15+细胞）在毛囊内的分布情况。 9天以后，，对照组及LFEMF组的小鼠脱毛处皮肤转为灰色，9、16天时，LFEMF组的毛发生长评分均高于对照组（P0.05）。同时，HE染色显示3天的LFEMF组毛囊底端毛乳头增大，并被毛母质细胞包绕，毛乳头上方可见黑色素形成，对照组毛囊毛乳头上方可见增多的细胞层，但未包绕真皮乳头；9、16天时，LFEMF组内毛囊长度较对照组增加（P0.05）。 免疫组织化学结果显示：3、9、16天时，LFEMF组内Ki67+细胞及K15+干细胞计数均多于对照组（P0.05）。其中，毛囊结构中，Ki67+细胞主要分布于毛囊底端毛母质区及外根鞘，K15+干细胞主要见于毛囊底端及外根鞘。随着时间变化，两组内K15+干细胞计数亦呈下降趋势。同时，K15免疫荧光结果亦可见LFEMF组毛囊内K15+表达均强于对照组。 3、9、16天时，LFEMF组中的KGF基因及蛋白表达量均高于对照组(P0.05)；激光共聚焦显微镜下可见两组中KGF主要分布于毛囊底端的母质细胞周围及毛囊内根鞘，且LFEMF组中KGF阳性表达高于对照组。同时，与对照组相比，3、9、16天的LFEMF组β-catenin基因表达均上调(P0.05)。 结论低频电磁场可促进C57BL/6小鼠的毛发生长，其机制是低频电磁场促进KGF及β-catenin的表达、提高毛囊内K15+干细胞和毛囊底端毛母质区及外根鞘处细胞的增殖能力。
【关键词】：低频电磁场 毛发生长 角质化细胞生长因子 增殖
【学位授予单位】：暨南大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2014
【分类号】：R322.995
【目录】：

• 英文缩写词表3-4
• 中文摘要4-6
• Abstract6-8
• 目录8-13
• 前言13-16
• 1.实验材料16-19
• 1.1 实验动物16
• 1.2 主要实验仪器及器械16-17
• 1.3 主要实验试剂17-19
• 2.实验方法19-30
• 2.1. 主要试剂的配制方法19-20
• 2.2 毛囊生长周期动物模型的建立20-21
• 2.3 实验分组和干预方法21
• 2.4 体外毛发生长评分21
• 2.5 组织标本的收集和处理21
• 2.6 主要实验操作过程21-30
• 3 统计学方法30-31
• 4 实验结果31-47
• 4.1 小鼠毛发生长模型31
• 4.2 小鼠毛发生长情况31-33
• 4.3 小鼠脱毛处再生毛囊生长情况33-35
• 4.3.1 镜下观察毛囊生长情况33-34
• 4.3.2 定量分析毛囊长度34-35
• 4.4 小鼠脱毛处Ki67+细胞表达情况35-38
• 4.4.1 毛囊中Ki67表达35-38
• 4.5 小鼠脱毛处K15+干细胞表达情况38-42
• 4.5.1 毛囊中K15表达38-41
• 4.5.2 免疫荧光法观察K15~+表达41-42
• 4.6 KGF表达变化42-45
• 4.6.1 KGF基因表达42-43
• 4.6.2 KGF蛋白表达43-44
• 4.6.3 KGF在毛囊中的表达位置44-45
• 4.7 β-catenin基因表达45-47
• 5 讨论47-51
• 6 结论51-52
• 参考文献52-56
• 在校期间完成论文及科研成果56-57
• 致谢57

【参考文献】

中国期刊全文数据库 前8条

1 杨亚军;王冬春;周秋贵;丁家宜;;水溶性米诺地尔对C57BL/6小鼠毛发生长影响的研究[J];海峡药学;2007年07期

2 邢书亮;亓发芝;徐剑炜;张勇;王研;冯自豪;杨震;;脂溢性脱发成年男性额部毛囊角蛋白15表达及意义[J];中国临床医学;2007年02期

3 张鸣生;何斌;朱洪翔;吴博;庞文君;李东风;林秋雄;刘旋安;徐达传;;不同频率低强度脉冲电磁场对表皮干细胞增殖的影响[J];中华物理医学与康复杂志;2006年11期

4 张鸣生;何斌;朱洪翔;吴博;庞文君;李叶扬;徐达传;;低强度电磁场对创面愈合过程中表皮干细胞增殖和分化的影响[J];中国临床解剖学杂志;2006年06期

5 张敏;朱晓文;王雪儿;张琳;;C57BL/6小鼠皮肤毛囊发育的实验研究[J];中国临床解剖学杂志;2010年01期

6 邱家琦;张鸣生;李新平;白文芳;吴博;白利明;徐武华;;低频电磁场对BDNF基因修饰的BMSCs增殖影响的实验研究[J];中国临床解剖学杂志;2012年01期

7 梁玲;李新平;白文芳;白利明;朱洪翔;许伟成;冯玉;王鑫;陈艺;张鸣生;;低频电磁场在基因修饰表皮干细胞移植修复创面中的作用[J];中国组织工程研究;2013年32期

8 张菊芳;沈海燕;王宇燕;祝飞;贾明;郭晓波;;雄激素型脱发患者高密度毛囊单位移植并发症分析[J];中华移植杂志(电子版);2012年02期

本文编号：954611