应用嘌呤霉素肾炎模型研究足细胞损害与肾小球硬化进展的过程

发布时间：2017-10-01 19:14

  本文关键词：应用嘌呤霉素肾炎模型研究足细胞损害与肾小球硬化进展的过程

  更多相关文章： 嘌呤霉素氨基核苷大鼠模型(PAN) 肾小球面积 肾小球硬化 nephrin WT-1 CKD

【摘要】：背景与目的：足细胞损害贯穿于肾小球疾病和肾小球硬化的始终，嘌呤霉素氨基核苷大鼠肾病模型（PAN模型）是典型的反映足细胞损伤的动物模型，多年来用于足细胞损伤的肾小球疾病的研究。本研究应用PAN模型，从临床、病理及足细胞相关蛋白nephrin和WT-1在足细胞中的表达等方面研究疾病不同阶段足细胞损害在肾小球硬化进展过程中的意义。 方法：单次尾静脉注射嘌呤霉素氨基核苷制作PAN模型，对照组注射等量生理盐水。测定4周、14周及20周的血压、24小时尿蛋白定量、血酯及血肌酐等指标，并处死大鼠，取其肾脏，石蜡包埋，切片，PAS及免疫组化染色，高倍镜下拍片。PAS染色测定肾小球面积及硬化指数，免疫组化进行nephrin及WT-1表达的染色，，半定量分析测定nephrin的表达，在显微镜高倍镜下计数肾小球WT-1表达的足细胞核的数量，上述所有数据进行统计学分析。 结果：1.临床指标：PAN组的24小时尿蛋白定量在第8天达峰值，同时血浆蛋白明显降低，血胆固醇和甘油三酯明显增高；24小时尿蛋白定量在第4周降至正常，然后又逐渐增高，在14周和20周时显著高于对照组；PAN组收缩压在4周、14周和20周均值分别是131.40mmHg，143.43mmHg，和133.56mmHg，均高于对照组；PAN组血清肌酐在4周时为50.54±3.66μmol/L，随着时间增长，20周为70.62±4.83μmol/L明显高于对照组。上述数据均有统计学差异。2.形态学指标：PAN组的肾小球硬化指数(GSI)在4周、14周和20周分别是6.21%，25.35%和30.49%，明显高于对照组。PAN组在4周时肾小球面积与对照组比较没有明显差异（395.44±5.55μm2和381.31±4.94μm2，P0.05）、14周时PAN组的肾小球面积大于对照组（均值为522.36±13.04μm2和469.20±8.16μm2， P0.01）。但是在20周时PAN组肾小球面积小于对照组（438.59±12.11μm2和492.69±58.24μm2，P0.001）,差异均有统计学意义。并且20周时肾小球硬化指数与肾小球面积之间的相关系数为-0.82，呈强负相关关系。3.nephrin的表达：对照组免疫组化染色nephrin沿肾小球毛细血管襻呈较为均匀的黄褐色粗颗粒样的线状分布，而PAN组在4周时与对照组比较nephrin略有分布不均，部分区域染色减弱或消失（均值为8.23±0.875和10.23±1.256，P0.001），14周时在有节段性硬化的区域nephrin无表达（均值为7.58±0.712和9.74±1.234，P0.001），而在20周时硬化的区域基本无表达（均值为6.08±1.342和7.88±0.924，P0.001），与对照组比较均有明显减少。4.WT-1的表达：4周时WT-1在足细胞核表达，呈深棕黄色粗大颗粒，与对照组比较无统计学意义（均值为10.11±1.557和10.14±2.022，P0.05）；14周时PAN组WT-1表达较对照组有所减少（均值为6.8±1.887和9.02±1.732, P0.001）；20周时与对照组比较PAN组WT-1明显减少（均值为4.43±1.007和7.34±1.216，P0.001），足细胞数量随着时间的延长依次递减。 结论：1.成功建立PAN模型，早期典型肾病综合征、逐渐发展为慢性肾脏病（CKD），肾小球硬化的过程；2.在PAN模型中，在20周时肾小球硬化指数和肾小球面积之间是负相关关系，肾小球硬化程度越重，肾小球面积越小；3. nephrin的表达在PAN模型（肾病综合征期）略有下降，在CKD肾小球硬化过程中进行性减少，WT-1的表达随着CKD的进展逐渐减少。nephrin表达的降低可以反映足细胞的结构及功能破坏的程度，WT-1的表达减少可反映足细胞数量的减少。因此，足细胞的损伤与肾小球硬化有密切的关系。
【关键词】：嘌呤霉素氨基核苷大鼠模型(PAN) 肾小球面积 肾小球硬化 nephrin WT-1 CKD
【学位授予单位】：宁夏医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2013
【分类号】：R692.3;R-332
【目录】：

• 摘要4-6
• ABSTRACT6-9
• 符号说明9-14
• 引言14-16
• 文献回顾16-19
• 材料和方法19-26
• 1 材料19-21
• 1.1 实验动物19
• 1.2 药物及试剂19
• 1.3 试剂的配置19-20
• 1.4 实验仪器20-21
• 2 方法21-24
• 2.1 大鼠嘌呤霉素氨基核苷肾病模型的建立21
• 2.2 各项生化指标的测定21-22
• 2.3 肾小球硬化指数的测定22-23
• 2.4 肾小球面积的测定23
• 2.5 肾小球 nephrin 的表达23-24
• 2.6 WT-1 的测定24
• 3 统计24-26
• 结果26-30
• 1 动物模型的评价26-27
• 1.1 PAN 注射后 24 小时尿蛋白定量的改变26
• 1.2 PAN 注射后各种血清生化指标的改变26-27
• 1.3 PAN 注射后收缩压的改变27
• 2 肾小球面积及肾小球硬化指数的关系27-28
• 2.1 肾小球硬化（FSGS）的形成27
• 2.2 PAN 模型大鼠肾小球面积的改变27-28
• 2.3 PAN 模型大鼠肾小球面积（GA）与肾小球硬化指数（GI）的关系28
• 3 nephrin 的表达28-29
• 4 WT-1 的表达29-30
• 讨论30-34
• 结论34-35
• 附图35-43
• 参考文献43-48
• 糖尿病肾病足细胞损伤的机理48-59
• 参考文献54-59
• 致谢59-60
• 攻读学位期间发表的学术论文目录60

【共引文献】

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8 王

本文编号：955165