HGF单克隆抗体的制备及HGF ScFv单链抗体的制备

发布时间：2017-10-03 07:15

  本文关键词：HGF单克隆抗体的制备及HGF ScFv单链抗体的制备

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【摘要】：目的： 肝细胞生长因子(Hepatocyte growth factor,HGF)是一种旁腺体分泌多功能多效性的细胞因子,主要在肝脏中产生,通过与c-MET受体结合在肿瘤中发挥多种作用,能增加趋化运动和促进恶性肿瘤的生长。本研究利用抗体工程技术制备HGF鼠单克隆抗体和HGF单链抗体(single chain variable fragment, ScFv),耦合微纳米材料悬臂梁器件,力求开发出肝癌患者早期血清学诊断的有效试剂盒。 方法： 1.用本课题组表达纯化的融合蛋白HGF免疫Balb/c小鼠,从而得到能分泌HGF的B细胞。 2.用细胞融合技术将小鼠脾细胞与骨髓瘤细胞系SP2/0融合,用ELISA法筛选 具有分泌功能的单克隆抗体。 3.用ELISA法,Western Blotting方法对筛选出的单克隆抗体进行功能性验证,应用HiTrap Protein G HP柱纯化抗体。 4.应用夹心ELISA法将HGF单克隆抗体用于HCC患者血清的检测,以及用于悬臂梁纳米器件的连接。 5.用PCR法克隆出HGF单抗的重链轻链可变区以及Overlap PCR法连接重链和轻链可变区。 6.用重组技术构建Payz-HGF ScFv质粒,在大肠杆菌16C9中大量表达,应用HitrapFF亲和层析柱纯化HGF ScFv抗体。 结果： 1.HGF融合蛋白的免疫效果良好,血清学效价达到1：16000。 2.筛选出3株HGF单克隆抗体,分别是HGF H-1(IgG2b), HGF H-2(IgG2a), HGF H-3(IgG1)。 3. HGF H-1(IgG2b), HGF H-2(IgG2a)能很好应用于ELISA和Western Blotting对HGF的检测。制备得到HGF H-1、HGF H-2分别为7mg和8mg。 4.用biotin成功标记了HGF H-1,应用夹心法ELISA法检测30例HCC患者血清和30例正常人血清,差异明显。 5. HGF H-1成功耦合在悬臂梁纳米器件,初步得出对HGF的检测限为0.76pg。 6.构建了Payz-HGF ScFv质粒,表达纯化得到HGF ScFv抗体15mg。 结论： 1.本研究制备了三株针对细胞因子HGF的鼠单克隆抗体,抗体亚型分别为IgG2a, IgG2b, IgG1。 2.本研究初步建立了HGF单克隆抗体夹心法ELISA检测试剂盒,并且将抗体用于微纳米悬臂梁器件的耦合。 3.本研究制备了HGF ScFv抗体。
【关键词】：肝细胞生长因子 细胞因子 单克隆抗体 单链抗体 试剂盒
【学位授予单位】：天津医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2014
【分类号】：R392
【目录】：

• 中文摘要4-6
• Abstract6-9
• ~.略语/符号说明9-10
• 前言10-14
• 研究现状、成果10-13
• 研究目的、方法13-14
• 对象和方法14-31
• 1.1 实验材料14-15
• 1.2 主要试剂及溶液的配制15-19
• 1.3 主要仪器设备19
• 1.4 实验方法19-31
• 结果31-42
• 2.1 抗HGF鼠单克隆抗体的制备31-34
• 2.2 抗HGF鼠单克隆抗体的纯化34
• 2.3 抗HGF鼠单克隆抗体效价的测定34-35
• 2.4 抗HGF鼠单克隆抗体的应用35-38
• 2.5 ScFv HGF单链抗体的制备38-39
• 2.6 ScFv HGF单链抗体的制备39-42
• 讨论42-45
• 3.1 HGF单克隆抗体的制备及应用42-43
• 3.2 HGF ScFv抗体的制备及性质的鉴定43-45
• 结论45-46
• 参考文献46-49
• 发表论文和参加科研情况说明49-50
• 综述50-68
• 综述参考文献61-68
• 致谢68

【参考文献】

中国期刊全文数据库 前1条

1 ;Screening and evaluation of human single-chain fragment variable antibody against hepatitis B virus surface antigen[J];Hepatobiliary & Pancreatic Diseases International;2006年02期

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本文编号：963855