新型免疫佐剂环二鸟苷酸的制备与纯化

发布时间：2017-10-03 12:07

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【摘要】：目的制备新型免疫佐剂环二鸟苷酸(c-di-GMP)并进行纯化。方法利用前期重组构建并在大肠杆菌中成功表达的霍乱弧菌VCA0956蛋白(含有GGDEF结构域)作为合成酶,在反应体系中采用酶促反应将2分子鸟苷酸GTP催化缩合成一分子c-di-GMP。利用反相液相色谱仪分离纯化粗产物中的c-di-GMP,柱温25℃,流动相为乙腈-10 mmol/L乙酸铵溶液(体积比为5∶95逐渐变为30∶70),流速1 m L/min。结果 c-di-GMP从反应粗产物中被有效的分离纯化,同时,经质谱分析仪分析鉴定,获得高纯度的c-di-GMP。结论成功从酶促反应体系中分离并纯化了c-di-GMP。
【作者单位】： 山东省农科院畜牧兽医研究所;山东省畜禽疫病防治与繁育重点实验室;山东省农业科学院;
【关键词】： 免疫佐剂 环二鸟苷酸 纯化 反相高效液相色谱
【基金】：山东省自然科学基金(ZR2014YL013) 国家自然科学基金(31370189,31170146) 公益性行业(农业)科研专项经费(201303046)
【分类号】：R392
【正文快照】： 环二鸟苷酸(cyclic diguanylate,c-di-GMP)是细菌中保守的第二信使分子,参与调节多种生理功能,包括细菌的运动、定置、分化、生物被膜形成、致病因子产生、细胞间通信等[1]。近年来研究发现c-di-GMP作为免疫调节剂作用于真核细胞可产生很好的免疫调节作用,实验研究表明其有可

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