伯氏疏螺旋体重组膜蛋白rBmpA对人巨噬细胞株THP-1细胞体外作用研究

发布时间：2017-10-04 19:03

  本文关键词：伯氏疏螺旋体重组膜蛋白rBmpA对人巨噬细胞株THP-1细胞体外作用研究

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【摘要】：研究目的： 体外培养人单核巨噬细胞株(THP-1细胞),使用不同浓度伯氏疏螺旋体重组膜蛋白-rBmpA刺激THP-1细胞,收集不同时间点的细胞培养上清液,检测细胞上清中细胞因子人IL-1β,IL-6,IL-8,IL-12p70,TNF-α及MIF含量,来探讨伯氏疏螺旋体膜蛋白-BmpA在莱姆关节炎致病机制中的作用。 研究方法： 1、THP-1细胞培养：在37℃,5%CO2培养箱中用含10%胎牛血清的1640培养基培养THP-1细胞,平均3-4天换液传代一次。 2、THP-1细胞诱导：调整THP-1细胞数为5×105/mL,加入PMA,使PMA的浓度为100ng/ML。将细胞悬液加入到96孔细胞培养板中,100μL/孔,37℃,5%CO2培养箱中培养24小时诱导细胞贴壁。 3、rBnpA处理THP-1细胞：细胞贴壁后,吸掉上清,之后加入LPS及rBmpA处理细胞,放入37℃,5%CO2培养箱中培养24h,48小时,72小时。分别收集各时间点细胞培养上清。 4、细胞因子检测：ELISA检测细胞上清中炎性细胞因子人IL-1β,IL-6,IL-8, IL-12p70,TNF-α及MIF含量。 研究结果： 1、THP-1细胞在10%胎牛血清的1640培养基中悬浮生长,生长状态良好。 2、THP-1细胞在100ng/ml-PMA作用下成功分化为成熟的贴壁细胞。 3、检测THP-1细胞培养上清液中炎性细胞因子人IL-1β,IL-6,IL-8,IL-12-,70和TNF-α含量,与正常对照组比较,差别有统计学意义(P0.05,P0.01)。 4、检测THP-1细胞培养上清液中细胞因子人MIF含量,与正常对照组比较,差别没有统计学意义(P0.05)。 结论： 1、rBmpA在刺激THP-1细胞分泌炎性细胞因子人IL-1β,IL-6,IL-8,IL-12p-,70和TNF-α中起到关键作用。 2、rBmpA(20ug/mL、40ug/mL)不能刺激THP-1细胞分泌细胞因子人MIF。 3、BmpA可能通过诱导炎性细胞因子产生引起莱姆关节炎。
【关键词】：莱姆关节炎 伯氏疏螺旋体 rBmpA 巨噬细胞细胞株
【学位授予单位】：昆明医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2014
【分类号】：R377
【目录】：

• 中文摘要6-8
• Abstract8-10
• 相关缩略词10-11
• 前言11-16
• 1 BmpA(Borrelia burgdorferi membrance protein A)12
• 2 BmpA与莱姆关节炎关系12-13
• 3 莱姆关节炎致病机制13-16
• 1 材料16-19
• 1.1 主要仪器16-17
• 1.2 主要试剂17-18
• 1.3 主要溶液试剂配制18-19
• 2 实验方法19-23
• 2.1 rBmpA蛋白液制备19
• 2.2 THP-1细胞的培养和传代19-20
• 2.3 THP-1细胞的诱导20
• 2.4 加rBmpA处理THP-1细胞20-21
• 2.5 细胞因子检测21
• 2.6 统计学处理21-23
• 3 实验结果23-31
• 3.1 细胞培养形态观察23-25
• 3.2 rBmpA对THP-1细胞分泌细胞因子HumanIL-1β的测定25-26
• 3.3 rBmpA对THP-1细胞分泌细胞因子HumanIL-6的测定26-27
• 3.4 rBmpA对THP-1细胞分泌细胞因子HumanIL-8的测定27-28
• 3.5 rBmpA对THP-1细胞分泌细胞因子HumanIL-12p70的测定28-29
• 3.6 rBmpA对THP-1细胞分泌细胞因子HumanTNF-α的测定29-30
• 3.7 rBmpA对THP-1细胞分泌细胞因子HumanMIF的测定30-31
• 4 讨论31-33
• 5 结论33-34
• 参考文献34-37
• 综述37-44
• 参考文献42-44
• 攻读学位期间发表的论文44-45
• 致谢45

【参考文献】

中国期刊全文数据库 前8条

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本文编号：972303