LIF慢病毒载体的构建及其在骨髓间充质干细胞中的稳定表达

发布时间：2017-10-05 00:00

  本文关键词：LIF慢病毒载体的构建及其在骨髓间充质干细胞中的稳定表达

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【摘要】：目的：将LIF基因在体外转染转染于骨髓间充质干细胞，转染成功后通过测试，以确定LIF能否在转染后的骨髓间充质干细胞中稳定表达，以促进周围神经再生，减少疤痕。 方法：（1）大鼠骨髓间充质干细胞分离提取，原代培养及表型鉴定，采用密度梯度离心法联合贴壁法体外分离、培养大鼠骨髓间充质干细胞，在倒置相差显微镜下观察其形态并绘制其生长曲线，用流式细胞仪测定表面标记对骨髓间充质干细胞进行鉴定。（2）LIF慢病毒载体的构建、包装。（3）LIF慢病毒载体在骨髓间充质干细胞中转染，用ELISA检测LIF基因及蛋白表达水平。 结果：（1）骨髓间充质干细胞成功的从一周龄大鼠骨髓血内分离出，，其镜下表现为成纤维细胞样生长，可以向成脂、成骨细胞转化，通过流式细胞仪检测，其表面标记物CD44，CD90表达均为阳性，而CD34，CD45表达全部为阴性；（3）通过ELISA法进行了蛋白鉴定，目的基因大鼠LIF在骨髓间充质干细胞中得到了稳定表达。 结论： LIF基因片段通过脂质体与慢病毒载体相连，将其转染于体外培养的骨髓间充质干细胞，发现LIF基因可以在骨髓间充质干细胞内得到持续、稳定的表达。研究证明LIF对损伤神经损伤修复有重要作用，特别是对轴突的生长有极大的促进作用。LIF慢病毒载体构建成功，LIF在局部持续、稳定的表达，为神经损伤的修复开辟了新途径，为进行下一步动物试验奠定了基础。
【关键词】：骨髓间充质干细胞 LIF 慢病毒载体
【学位授予单位】：长春中医药大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2014
【分类号】：R329
【目录】：

• 中文摘要5-6
• ABSTRACT6-7
• 英文缩略语7-8
• 前言8-9
• 文献综述9-22
• 摘要9
• 1 周围神经损伤与再生9-13
• 2 神经营养因子13-17
• 3 间充质干细胞17-21
• 4 展望21-22
• 实验研究22-35
• 1 大鼠骨髓干细胞的提取、分离、培养及鉴定22-31
• 1.1 实验材料22-25
• 1.2 实验方法25-27
• 1.3 实验结果27-31
• 2 LIF基因转染于骨髓间充质干细胞及检测31-35
• 2.1 实验材料31-32
• 2.2 实验方法32-33
• 2.3 实验结果33-35
• 讨论35-37
• 结语37-38
• 致谢38-39
• 参考文献39-46

【共引文献】

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1 崔明亮;心内膜下移植骨髓单个核细胞和间充质干细胞对猪急性心肌梗死疗效的实验研究[D];第四军医大学;2013年

2 项永生;强化表达VEGF的骨髓基质细胞系的构建及其鉴定[D];南方医科大学;2013年

3 姜南;大鼠坐骨神经横断后近远端神经基因表达和生物学进程分析的对比研究[D];吉林大学;2014年

本文编号：973573