结核杆菌全菌裂解物和全脂质抗原对人外周血单个核细胞活化和增殖的作用

发布时间：2017-10-05 09:39

  本文关键词：结核杆菌全菌裂解物和全脂质抗原对人外周血单个核细胞活化和增殖的作用

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【摘要】：背景及目的由结核分枝杆菌（Mtb）感染所致的结核病是人类已知的最古老的传染病之一，但至今其预防和治疗仍不尽人意。近年来，结核病仍是世界范围内因感染单一病原体而死亡的最重要病因之一，且其患病人数持续增加。卡介苗作为唯一有效的保护性疫苗，已经保护人类近一百年。世界卫生组织（WHO）报道，对于儿童注射卡介苗进行结核病预防是有效的，特别是较严重类型结核病（如结核性脑膜炎、粟粒性结核病），但对保护成人肺结核方面缺乏稳定性。所以开发新型疫苗势在必行。目前对Mtb大部分疫苗和T细胞表位的研究都侧重于由MHCⅡ类分子提呈的分泌到胞外的可溶性蛋白，对于胞壁中的抗原成分了解甚少。Mtb细胞壁中的脂质结构，就像一层厚厚的保护荚膜，可以抵抗不利环境的侵害，这些脂质成分具有免疫调节作用，在宿主固有免疫和适应性免疫应答的诱导中都扮演着角色，提示脂类代谢可能是Mtb非比寻常的逃逸能力的核心。本实验拟观察Mtb全菌裂解物和全脂质抗原对人外周血单个核细胞（PBMC）活化和增殖的作用，进而初步探讨脂类抗原在结核感染中是否存在特异性作用。 方法健康成人PBMC1×106/ml，分别加结核杆菌全菌裂解物10μg/ml或全脂质10μg/ml进行刺激，同时给予重组人白介素-2（rhIL-2）50u/ml维持细胞增殖，另外设仅加rhIL-2的对照组，培养至第6、9、12天，，收集培养扩增细胞，用流式细胞术检测T细胞以及不同亚群的增殖情况和胞内细胞因子（IFN-γ）的产生。 结果两组抗原刺激组均能刺激PBMC中T细胞的活化和增殖，第9天时反应最为明显，与对照组相比，全菌裂解物组CD8+T细胞比例降低而CD4-CD8-T细胞比例明显增高；全脂质组CD4+T细胞以及CD4+CD8+T细胞比例增高，差异有统计学意义（P0.05）。全菌裂解物早期可以有效地刺激γδT细胞迅速增殖，而全脂质组与对照组相比γδT细胞有所降低（P0.05）。培养至第12天，对分泌IFN-γ的细胞亚群分析，CD8+T细胞所占比例：全菌裂解物刺激组与全脂质刺激组均高于其相应的rhIL-2对照组（P0.05）；CD8-T细胞所占比例：全菌裂解物刺激组低于其相应对照组（P0.05），而全脂质刺激组高于其相应对照组（P0.05）。 结论结核杆菌全脂质抗原与全菌裂解物一样，能激活特异性免疫反应，具有潜在的疫苗组分可能性。
【关键词】：分枝杆菌 结核 T淋巴细胞亚群 脂类
【学位授予单位】：安徽医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2014
【分类号】：R392
【目录】：

• 中英文缩略词对照表6-8
• 中文摘要8-10
• ABSTRACT10-12
• 1 前言12-14
• 2 材料与方法14-21
• 2.1 实验材料14-17
• 2.1.1 结核分枝杆菌抗原及其配制14
• 2.1.2 实验标本来源14
• 2.1.3 主要试剂14-15
• 2.1.4 主要仪器和设备15
• 2.1.5 主要试剂配制15-17
• 2.2 实验方法17-20
• 2.2.1 人 AB 型血清的分离17
• 2.2.2 人外周血（全血）PBMC 分离17
• 2.2.3 人外周血白细胞浓缩液中 PBMC 分离17-18
• 2.2.4 PBMC 的冻存与复苏18
• 2.2.5 CFSE 染色18
• 2.2.6 两种抗原刺激人外周血 T 细胞亚群增殖的最适浓度及条件18-19
• 2.2.7 两种抗原刺激 PBMC 和扩增培养19
• 2.2.8 溶剂对照19
• 2.2.9 培养后细胞增殖情况及其增殖亚群检测19-20
• 2.2.10 细胞活化指标的检测（CD69）20
• 2.2.11 胞内细胞因子（IFN-γ）检测20
• 2.3 统计学分析20-21
• 3 结果21-33
• 3.1 两种抗原刺激人外周血 T 细胞亚群增殖的最适浓度及条件21
• 3.2 两种抗原刺激实验组及对照组 PBMC 增殖情况21-22
• 3.3 溶剂对照22
• 3.4 两种抗原刺激组增殖细胞的细胞表型分析22-28
• 3.4.1 T 细胞及其亚群（CD4、CD8）增殖情况22-25
• 3.4.2 γδT 细胞增殖情况25-27
• 3.4.3 B 细胞增殖情况27
• 3.4.4 NK 细胞增殖情况27-28
• 3.5 抗原刺激活化指标的检测结果（CD69）28-31
• 3.6 抗原刺激扩增培养后 T 细胞分泌 IFN-γ的检测31-33
• 4 讨论33-36
• 5 结论36-37
• 6 参考文献37-43
• 附录43-44
• 致谢44-45
• 综述45-52
• 参考文献49-52

【参考文献】

中国期刊全文数据库 前3条

1 ;Immunotherapeutical Potential of Mycobacterium Vaccae on M. Tuberculosis Infection in Mice[J];Cellular & Molecular Immunology;2009年01期

2 叶军;罗军敏;;结核病T细胞亚群的研究进展[J];免疫学杂志;2011年05期

3 雷建平;彭燕;熊国亮;张玉珍;周军;刘翼军;邢娟娟;李光明;雷铭宙;袁小亮;涂荣耀;涂少华;;不同时期卡介苗免疫治疗对结核病大鼠疗效和CD4~+CD8~+双阳(DP)T细胞的影响[J];中国防痨杂志;2006年06期

本文编号：976100