结核分枝杆菌c-di-AMP合成酶的表达和纯化以及小鼠多抗血清的制备

发布时间：2017-10-07 06:37

  本文关键词：结核分枝杆菌c-di-AMP合成酶的表达和纯化以及小鼠多抗血清的制备

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【摘要】：目的表达和纯化结核分枝杆菌c-di-AMP合成酶,并制备多克隆抗体,为研究c-di-AMP在MTB生理过程中的作用奠定基础。方法从MTB基因组中PCR扩增c-di-AMP合成酶Rv3586基因,构建原核表达载体,序列鉴定后,IPTG诱导目的基因表达,采用Western-blot鉴定目的蛋白,并用离子亲和层析法纯化重组蛋白;用纯化蛋白经背部皮下免疫小鼠,收集小鼠血清,用免疫学方法测定抗体滴度及其特异性。结果 PCR成功扩增Rv3586基因,限制性酶切分析和序列测定结果表明成功构建原核表达载体;表达的重组c-di-AMP合成酶蛋白分子质量大小约43ku,该蛋白可被抗His标签抗体和感染小鼠血清识别。用纯化蛋白免疫小鼠,初次免疫后抗体滴度可达1，

本文编号：987501