囊胚补偿法制备人-猪嵌合胚的研究
发布时间：2020-05-10 12:51
【摘要】：解决器官相关致死性疾病最有效方法是器官移植,但是可被用于移植供体的相应器官来源、数量十分有限,因此提出设想,用囊胚补偿法在动物体内制备出特定的人源化猪器官/组织,用来减缓出现的器官供应短缺的阻碍。由于猪,特别是小型猪和人类在众多生理生化、身体结构等方面相似性十分高,因此利用经基因编辑过的具有发育“空位”的小型猪与可在特定部位进行补偿的囊胚补偿法制备可培育出特定的人源化器官或组织的嵌合体猪,可被使用解决移植用供体器官数量严重不足的问题,同时减缓因为移植出现的免疫排斥反应。1.缺乏延胡索酸乙酰乙酸水解酶(Fumarylacetoacetatehydrolase,FAH)会引起遗传性酪氨酸血症I型(Hereditary tyrosinemia typel,HTI),致使患者的肝脏细胞出现凋亡现象,进而呈现出肝损伤表现。本研究利用 α-1,3-半乳糖基转移酶基因(α-1,3-galactosyltransferase,GGT41)敲除巴马猪的组织样本作为研究基础材料,利用CRISPR/Cas9和体细胞核移植技术制备FAH基因敲除(FAH+/-、FAH-/-)猪,并分析其健康与繁育状况。采集FAH+/-巴马猪血液,检测其血生化与血常规指标;当F0代FAH+/-巴马猪公猪性成熟后,与野生型(wild type,WT)母猪配种,以其产仔数评价繁育能力状况。通过WestemBlot检测FAH+/-巴马猪FAH蛋白表达量有所下降。此FAH+/-巴马猪的成功获得为后续制备HTI疾病模型猪及人源化器官的研究提供了可靠的数据及材料。2.KITLG(KIT ligand)又称干细胞因子(SCF),是一种结合CD117(C-kit)的细胞因子,是造血干/祖细胞生存、增生和分化的重要生长因子。由于KITLG基因的敲除会使机体造血系统发育出现障碍,使得该基因敲除猪无法在母体内正常生长发育,因此48d时杀猪取胚胎,10只胚胎中只有一只保持较为完整的形态,其余均退化剩余部分肉糜状组织。提取胚胎基因组DNA鉴定突变类型均为KITLG-/-,KITLG-/-胚胎与相似发育阶段野生型胚胎比较,体型明显小于野生型且肝脏也小于野生型的且呈现出灰白色;HE染色后观察KITLG-/-胚胎肝脏切片中缺少血管内皮血细胞。由于KITLG基因的敲除会造成该基因克隆猪造血功能缺陷使其无法存活,因此获得相关早期胚胎,为后续制备可生产人血液嵌合体猪奠定研究基础。3.本研究通过囊胚补偿法,利用可造成机体特定器官发育受阻的FAH和KITLG基因的敲除胚胎作为实验组,通过显微注射将人类胚胎干细胞注入来填补发育空缺,在理论上增加嵌合体的嵌合成功率与嵌合程度。KITLG-/-胚胎在注射H9-td Tomato细胞后并未像FAH-/-胚胎和孤雌胚胎一样可正常发育到囊胚阶段;在随后观察各组桑椹胚期及囊胚期注射H9-td Tomato细胞胚胎时,发现它们的桑椹胚数及囊胚数与对照组未进行注射的相比,数目均有所下降。由于人、猪之间物种差异极大,通过荧光显微镜观察,猪囊胚与H9-td Tomato细胞嵌合率极低。总之,本研究探索了利用囊胚补偿法制备人-猪嵌合胚,为将来获得人源化器官,推进了异种嵌合体及异种移植的研究并提供了可供参考的有价值基础理论研究数据。本研究将畜牧学与医学相结合,是畜牧学应用于医学的研究。
【图文】：
宦畚木鄄罚浚怼龇ㄖ票溉耍酧砬逗希妫欤椋舻难芯浚]3?胎１１９１枚，l挘磁咛ィ常矗睹叮芗疲保担常访吨毓古咭浦玻锻肥芴迥钢怼＃餐肥苠义咸迥钢硪浦玻牛矗毓古咛ィ蓖啡焉镏林掌冢低纷兄沓錾ū恚保矗迹保常义希校茫也庑蚣ǎ低纷兄砭焕嘈停ㄥ澹澹欤猓穑┑目拢サ任换蚯贸恚ㄍ迹保义希玻幻唬毓古咛ヒ浦沧椋浦玻赐肥芴迥钢恚ū恚保矗俏梗危裕拢米橹幸煌峰义先焉镏林掌冢錾赐分碜校蓖酚诔錾螅刺焖劳觯餐烦錾螅堤焖劳觯蓖峰义铣錾螅短焖劳觯校茫也庑蚣ǎ赐肪拢任换蚯贸怼ｅ义希蹋粒幔幔В徨澹铃澹铃义希埽唬坼澹苠澹埽椋苠澹埽唬苠澹斟澹苠澹苠澹埽睿苠灏隋澹埽哄义希慑澹保保保у澹慑澹皱澹埽蝈澹皱澹掊澹戾澹危靛澹皱澹哄澹澹慑澹哄澹驽澹戾澹苠澹戾澹慑义希保濉鲥澹埽戾危鲥澹妫澹础ⅲу澹澹埽危苠澹海戾澹椋澹肌鲥澹苠邋危澹皱澹殄义狭铄澹卞澹猓疱宥″义辖疱危ｅ危巍赍危翦危翦危渝澹危危殄危垮危危危ゅ危垮危垮危浚鲥危危体危义希睢桢澹义希慑危粒澹苠澹埽椋苠澹埽驽澹。酰苠澹埽椋埽椋苠澹粒海危徨澹铃义希埽澹郑皱澹鲥澹皱澹幔斟澹澹皱澹觯觯鲥澹粒皱义希澹危诲澹皱澹澹澹殄澹咤澹澹埽
本文编号：2657327
【图文】：
宦畚木鄄罚浚怼龇ㄖ票溉耍酧砬逗希妫欤椋舻难芯浚]3?胎１１９１枚，l挘磁咛ィ常矗睹叮芗疲保担常访吨毓古咭浦玻锻肥芴迥钢怼＃餐肥苠义咸迥钢硪浦玻牛矗毓古咛ィ蓖啡焉镏林掌冢低纷兄沓錾ū恚保矗迹保常义希校茫也庑蚣ǎ低纷兄砭焕嘈停ㄥ澹澹欤猓穑┑目拢サ任换蚯贸恚ㄍ迹保义希玻幻唬毓古咛ヒ浦沧椋浦玻赐肥芴迥钢恚ū恚保矗俏梗危裕拢米橹幸煌峰义先焉镏林掌冢錾赐分碜校蓖酚诔錾螅刺焖劳觯餐烦錾螅堤焖劳觯蓖峰义铣錾螅短焖劳觯校茫也庑蚣ǎ赐肪拢任换蚯贸怼ｅ义希蹋粒幔幔В徨澹铃澹铃义希埽唬坼澹苠澹埽椋苠澹埽唬苠澹斟澹苠澹苠澹埽睿苠灏隋澹埽哄义希慑澹保保保у澹慑澹皱澹埽蝈澹皱澹掊澹戾澹危靛澹皱澹哄澹澹慑澹哄澹驽澹戾澹苠澹戾澹慑义希保濉鲥澹埽戾危鲥澹妫澹础ⅲу澹澹埽危苠澹海戾澹椋澹肌鲥澹苠邋危澹皱澹殄义狭铄澹卞澹猓疱宥″义辖疱危ｅ危巍赍危翦危翦危渝澹危危殄危垮危危危ゅ危垮危垮危浚鲥危危体危义希睢桢澹义希慑危粒澹苠澹埽椋苠澹埽驽澹。酰苠澹埽椋埽椋苠澹粒海危徨澹铃义希埽澹郑皱澹鲥澹皱澹幔斟澹澹皱澹觯觯鲥澹粒皱义希澹危诲澹皱澹澹澹殄澹咤澹澹埽
本文编号：2657327
本文链接：https://www.wllwen.com/yixuelunwen/swyx/2657327.html
