嗜酸乳杆菌干预大鼠回肠贮袋炎的实验研究

发布时间：2017-10-15 15:42

  本文关键词：嗜酸乳杆菌干预大鼠回肠贮袋炎的实验研究

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【摘要】：本研究利用显微外科技术制作建立大鼠回肠贮袋模型,随后采用葡聚糖硫酸钠(Dextran surfate sodium,DSS)诱导大鼠回肠贮袋炎模型,通过对比DSS干预前后大鼠粪便评分、组织病理学的变化和贮袋(或末端回场)组织中炎症标志物IL-1β、IL-6、TNF-α和IL-10的mRNA转录水平评估贮袋炎模型。大鼠贮袋炎模型成功建立后给予嗜酸乳杆菌(Lactobacillus acidophilus,LA)灌胃治疗,通过对比大鼠粪便评分、评价贮袋组织病理改变、实时荧光定量PCR技术检测上述炎症标志物相对表达量变化及免疫组化检测肠粘膜紧密连接蛋白ZO-1的表达水平综合评价治疗大鼠回肠贮袋炎的效果并探讨其机制。第一部分大鼠回肠贮袋炎模型的建立目的:利用显微外科技术建立大鼠回肠贮袋模型,并采用葡聚糖硫酸钠(dextran sulphate sodium salt,DSS)诱导大鼠回肠贮袋炎模型。方法:利用显微外科技术建立SD大鼠回肠贮袋模型,将模型大鼠随机分为回肠贮袋肛管吻合术(ileal pouch-anal anastomosis,IPAA)组,IPAA+DSS组:IPAA术后第31天开始,连续给4%DSS溶液100ml 4天,并设定假手术(Sham)组:开关腹为对照组。实验期间记录各组大鼠体重变化、便血情况、粪便性状(评分);术后第35天取对照组末端回肠组织,IPAA大鼠取回肠贮袋组织,HE染色进行组织学评分;实时荧光定量PCR检测组织IL-1β、IL-6、IL-10和TNF-α的mRNA表达水平。结果:IPAA术后大鼠体重在(9.42±1.44)天达到最低水平(285.47±10.30)g之后逐渐增长;给予DSS后大鼠体重出现持续下降,下降幅度为(72.92±6.60)g。IPAA+DSS组大鼠均出现血便(6/6),粪便评分低于IPAA组和Sham组(F=350.4,P0.05);给予DSS后大鼠的贮袋组织学评分高于Sham组和IPAA组(F=573.8,P0.05),且IPAA组贮袋评分高于Sham组末端回肠组织评分(t=20.55,P0.05)。IPAA+DSS组贮袋组织中IL-1β、IL-6和TNF-α的mRNA转录水平均高于Sham组和IPAA组(F=886.4,P0.05;F=773.1,P0.05;F=575.2,P0.05),IL-10mRNA表达水平低于后两组(F=536.3,P0.05)。IPAA组贮袋组织中IL-1β、IL-6和TNF-α的mRNA转录水平高于Sham组(t=16.47,P0.05;t=8.29,P0.05;t=16.05,P0.05),IL-10mRNA表达水平低于Sham组(t=14.24,P0.05)。结论:在建立大鼠回肠贮袋模型基础上给予适量DSS可以建立理想的大鼠回肠贮袋炎模型。第二部分嗜酸乳杆菌干预大鼠回肠贮袋炎模型的实验研究目的:评价嗜酸乳杆菌干预大鼠回肠贮袋炎模型的治疗效果并探讨其作用机制。方法:利用显微外科技术建立SD大鼠回肠贮袋模型,并建立DSS诱导的回肠贮袋炎模型,将模型大鼠随机分为生理盐水组(NS组)、嗜酸乳杆菌组(LA组)和无干预组(non-intervention,NI组),各组分别给予3ml生理盐水灌胃、1×1010 CFU(3ml)嗜酸乳杆菌灌胃和无干预7天。实验期间观察记录各组大鼠体重变化、便血情况、粪便性状(评分);取大鼠回肠贮袋组织,HE染色进行组织学评分;实时荧光定量PCR检测贮袋组织中IL-1β、IL-6、IL-10、TNF-α的mRNA表达水平;免疫组化检测贮袋组织紧密连接蛋白ZO-1表达水平。结果:干预结束后LA组体重恢复水平高于NS组和NI组,差异有统计学意义(F=61.34,P0.05)。各组大鼠均出现血便,在DSS处理结束后LA组大鼠在3.17±0.75天血便消失,NS组和NI组分别为6.5±0.55天和6.17±0.75天。LA组大鼠粪便性状明显改善,粪便评分高于NS组和NI组(F=108.7,P0.05)。NS组和NI组大鼠回肠贮袋组织病理评分高于LA组,差异有统计学意义(F=31.23,P0.05)。LA组贮袋组织中IL-1β、IL-6和TNF-α的mRNA转录水平均低于NS组和NI组(F=373.6,P0.05;F=285.5,P0.05;F=132.9,P0.05),IL-10mRNA表达水平高于后两组(F=61.05,P0.05)。LA组贮袋组织中ZO-1表达水平高于NS组和NI组(F=8.23,P0.05),NS组和NI组贮袋组织各炎症因子和ZO-1表达差异无统计学差异(均P0.05)。结论:嗜酸乳杆菌可以治疗DSS诱导的大鼠回肠贮袋炎,其可能是通过抑制IL-1β、IL-6和TNF-α,促进IL-10的表达减轻贮袋炎症,并影响ZO-1蛋白表达改善肠道屏障功能。
【关键词】：回肠贮袋炎 嗜酸乳杆菌 葡聚糖硫酸钠 ZO-1
【学位授予单位】：天津医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R656
【目录】：

• 中文摘要4-6
• Abstract6-11
• 缩略语/符号说明11-12
• 前言12-15
• 研究现状、成果12-14
• 研究目的、方法14-15
• 第一部分 大鼠回肠贮袋炎模型的建立15-29
• 1.1 对象与方法15-22
• 1.1.1 实验对象和材料15-16
• 1.1.2 实验流程图16
• 1.1.3 大鼠回肠贮袋模型的制作16-18
• 1.1.4 诱导大鼠回肠贮袋炎18
• 1.1.5 一般情况及粪便评分18
• 1.1.6 组织HE染色及病理评18-19
• 1.1.7 PCR检测相关炎症因子mRNA转录19-22
• 1.1.8 统计处理方法22
• 1.2 结果22-27
• 1.2.1 大鼠生理状况改变22-24
• 1.2.2 组织病理学改变及组织学评分24-26
• 1.2.3 PCR检测肠管组织炎症指标26-27
• 1.3 讨论27-28
• 1.4 小结28-29
• 第二部分 嗜酸乳杆菌干预大鼠回肠贮袋炎模型29-41
• 2.1 对象与方法29-31
• 2.1.1 实验对象和材料29-30
• 2.1.2 粪便评分、HE、病理评分和RT-PCR按照第一部分操作30
• 2.1.3 免疫组化染色检测ZO-1 蛋白30-31
• 2.2 结果31-37
• 2.2.1 大鼠生理状况改变31-33
• 2.2.2 组织病理学改变及组织学评分33-34
• 2.2.3 PCR检测肠管组织炎症指标34-35
• 2.2.4 ZO-1蛋白表达水平35-37
• 2.3 讨论37-40
• 2.3.1 嗜酸乳杆菌在贮袋炎中的应用37
• 2.3.2 嗜酸乳杆菌对贮袋炎便血的治疗作用37
• 2.3.3 嗜酸乳杆菌与贮袋炎症因子37-39
• 2.3.4 嗜酸乳杆菌与肠屏障39-40
• 2.4 小结40-41
• 结论41-42
• 参考文献42-52
• 发表论文和参加科研情况说明52-53
• 综述 菌群与回肠贮袋炎的研究53-62
• 综述参考文献57-62
• 致谢62-63
• 个人简历63

【参考文献】

中国期刊全文数据库 前5条

1 Zhong-Yang Shen;Jing Zhang;Hong-Li Song;Wei-Ping Zheng;;Bone-marrow mesenchymal stem cells reduce rat intestinal ischemia-reperfusion injury, ZO-1 downregulation and tight junction disruption via a TNF-α-regulated mechanism[J];World Journal of Gastroenterology;2013年23期

2 Keyi Sun;Chao Xie;Donghua Xu;Xiaofan Yang;James Tang;Xiaohui Ji;;Lactobacillus isolates from healthy volunteers exert immunomodulatory effects on activated peripheral blood mononuclear cells[J];The Journal of Biomedical Research;2013年02期

3 Man-Chin Hua;Tzou-Yien Lin;Chien-Chang Chen;;Probiotic Bio-Three induces Th1 and anti-inflammatory effects in PBMC and dendritic cells[J];World Journal of Gastroenterology;2010年28期

4 ;Therapeutic effects of four strains of probiotics on experimental colitis in mice[J];World Journal of Gastroenterology;2009年03期

5 KM Lammers;S Ouburg;SA Morré;JBA Crusius;P Gionchetti;F Rizzello;C Morselli;E Caramelli;R Conte;G Poggioli;M Campieri;AS Pea;;Combined carriership of TLR9 -1237C and CD14 -260T alleles enhances the risk of developing chronic relapsing pouchitis[J];World Journal of Gastroenterology;2005年46期

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本文编号：1037970