人退变椎间盘内三种干细胞的生物学特性比较

发布时间：2017-10-19 21:16

  本文关键词：人退变椎间盘内三种干细胞的生物学特性比较

  更多相关文章： 退变椎间盘 髓核干细胞 纤维环干细胞 软骨终板干细胞 生物学特性

【摘要】：目的比较来源于同一人退变椎间盘内髓核干细胞(NPSCs)、纤维环干细胞(AFSCs)及软骨终板干细胞(CESCs)的生物学特性。方法收集7例经X线、MRI(核磁共振)确诊为椎间盘突出症患者,将取出的椎间盘仔细分离并进行酶消化、滤网过滤后获得NPSCs、AFSCs及CESCs。培养至第3代时,采用CCK-8(细胞增殖与活性检测试剂盒)检测三种干细胞的生长活性,并进行成脂、成骨及成软骨诱导分化。诱导21d后分别应用油红O染色检测细胞成脂能力,茜素红染色检测细胞成骨能力,甲苯胺蓝染色检测细胞成软骨能力。提取第3代细胞总RNA,分别行RT-PCR(实时定量逆转录-聚合酶链反应)检测成脂、成骨及成软骨相关基因的表达情况。结果来自于同一患者的NPSCs、AFSCs与CESCs形态上相似,无明显差异。生长曲线显示CESCs(第1、3、5、7、9、11、13、15天OD值分别为0.35±0.01,0.52±0.02,0.64±0.08,0.80±0.19,0.79±0.2,1.06±0.11,1.37±0.09,1.31±0.41)与AFSCs(第1、3、5、7、9、11、13、15天OD值分别为0.38±0.01,0.50±0.03,0.72±0.06,0.82±0.13,0.87±0.08,0.87±0.09,1.20±0.05,1.43±0.05)增殖能力要比NPSCs(第1、3、5、7、9、11、13、15天OD值分别为0.32±0.02,0.42±0.04,0.59±0.01,0.64±0.17,0.65±0.19,0.68±0.21,0.67±0.12,0.59±0.12)活跃。油红O染色、茜素红染色及甲苯胺蓝染色分别证实三种干细胞均可向脂、骨及软骨三系诱导分化。RT-PCR检测显示AFSCs在成脂(PPARγ基因相对表达量6.85±0.32,LPL基因相对表达量13.72±0.37)、及成软骨(COII基因相对表达量10.45±1.10,SOX-9基因相对表达量14.39±1.22)基因表达方面比NPSCs(PPARγ基因相对表达量6.63±0.50,LPL基因相对表达量8.41±0.42;COII基因相对表达量3.53±0.62,SOX-9基因相对表达量7.66±0.68)与CESCs(PPARγ基因相对表达量7.21±0.21,LPL基因相对表达量10.62±0.37;COII基因相对表达量8.26±0.49,SOX-9基因相对表达量13.70±1.10)略强;而成骨能力方面,CESCs最强(RUNX-2基因相对表达量7.30±1.1,COI基因相对表达量8.22±0.84),AFSCs(RUNX-2基因相对表达量6.20±0.92,COI基因相对表达量4.94±0.90)与NPSCs相当(RUNX-2基因相对表达量2.61±0.06,COI基因相对表达量7.05±0.82;);NPSCs的成脂基因尤其脂蛋白脂肪酶(LPL)基因表达较低。结论NPSCs、AFSCs及CESCs在体外培养中细胞形态相似,但生物学特性方面存在着差异。体外诱导分化及RT-PCR检测均提示AFSCs比其他两种干细胞在椎间盘组织工程领域中更加具有优越性。
【关键词】：退变椎间盘 髓核干细胞 纤维环干细胞 软骨终板干细胞 生物学特性
【学位授予单位】：苏州大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R681.5
【目录】：

• 中文摘要4-6
• Abstract6-9
• 引言9-10
• 第一部分人退变椎间盘内三种干细胞的提取、分离及培养10-15
• 材料与方法10-13
• 结果13-14
• 附图14-15
• 第二部分人退变椎间盘内三种干细胞的生物学特性比较15-29
• 一.材料15-17
• 二.方法17-23
• 结果23-27
• 讨论27-29
• 参考文献29-32
• 综述32-54
• 参考文献41-54
• 中英文缩略词表54-55
• 攻读学位期间公开发表的论文55-56
• 致谢56-58

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本文编号：1063358