饱和氢盐水对大鼠移植肝缺血再灌注损伤的保护作用及机制
本文关键词：饱和氢盐水对大鼠移植肝缺血再灌注损伤的保护作用及机制
更多相关文章： 氢气 原位肝移植 缺血再灌注损伤 自噬 凋亡 p53
【摘要】：目的:本研究拟探讨饱和氢盐水对大鼠移植肝缺血再灌注损伤的保护作用,并进一步探讨自噬可能参与的保护机制。方法:1、研究对象为健康雄性SD大鼠,周龄8~10周,体重220~250g,采用随机数字表法,将其分为3组(n=8):假手术组(sham组)、原位肝移植组(OLT组)和原位肝移植组+饱和氢盐水处理组(OLT+H组)。sham组仅在麻醉后接受单纯开关腹操作,OLT组和OLT+H组建立原位肝移植模型,并分别在门静脉开放5min后经肝下下腔静脉注射生理盐水或饱和氢盐水(hydrogen-rich saline,HRS)6mL/kg。各组受鼠术中均进行血压监测。门静脉开放后及sham组术毕6h时取血样,测定血清中天冬氨酸转氨酶(AST)和丙氨酸转氨酶(ALT)水平。取新鲜肝组织标本于10%中性福尔马林保存,苏木素-伊红(HE)染色后在光学显微镜下观察肝组织的病理学改变。取部分肝组织制成组织匀浆,检测丙二醛(MDA)水平和总超氧化物歧化酶(T-SOD)活性。2、研究对象为健康雄性SD大鼠,周龄8~10周,体重220~250g,采用随机数字表法,将其分为4组(n=8):假手术组(sham组)、原位肝移植组(OLT组)、原位肝移植组+饱和氢盐水处理组(OLT+H组)和原位肝移植组+饱和氢盐水+3-甲基腺嘌呤(3-MA)处理组(OLT+H+3-MA组)。sham组、OLT组和OLT+H组处理同第一部分。OLT+H+3-MA组在建立原位肝移植模型前1h腹腔注射自噬抑制剂3-甲基腺嘌呤(3-methyladenine,3-MA)2.5mg/kg。各组受鼠术中均进行血压监测。门静脉开放后及sham组术毕6h时取血样,测定血清ALT、AST水平。取新鲜肝组织标本分别于10%中性福尔马林和电镜液保存,在光学显微镜下观察肝组织的病理学改变并通过透射电镜观察自噬体的改变。取部分肝组织制成组织匀浆,检测MDA水平和T-SOD活性。肝细胞凋亡情况采用TUNEL染色检测。应用Western blot法检测自噬相关蛋白(LC3-II、Beclin-1)、凋亡相关蛋白(Caspase-3、Cyt-c)的表达水平及p53磷酸化水平。结果:1、有创血压监测显示,OLT组和OLT+H组受鼠无肝期血压均显著降低,再灌注后血压上升,术后10min血压恢复至正常,组间比较差异无统计学意义(P㧐0.05)。再灌注后6h,与sham组比较,OLT组和OLT+H组受鼠肝脏病理损伤明显,病理学评分显著升高(P㩳0.05);血清ALT和AST水平和肝组织MDA含量均明显升高(P㩳0.05);而肝组织T-SOD活性均明显降低(P㩳0.05)。与OLT组比较,OLT+H组中肝脏病理损伤明显减轻(P㩳0.05);血清ALT和AST水平和肝组织MDA含量均明显降低(P㩳0.05);而T-SOD活性明显升高(P㩳0.05)。2、有创血压监测显示OLT+H+3-MA组受鼠与OLT组、OLT+H组受鼠比较,血压变化差异无统计学意义(P㧐0.05)。与sham组比较,OLT组、OLT+H组和OLT+H+3-MA组受鼠肝脏病理损伤明显(P㩳0.05),血清ALT和AST水平均显著升高(P㩳0.05),肝组织MDA水平显著升高而T-SOD活性均显著降低(P㩳0.05),Caspase-3、Cyt-c蛋白表达均显著升高,凋亡指数显著升高(P㩳0.05),且OLT组、OLT+H组LC3-II、Beclin-1蛋白表达以及自噬体数目显著升高(P㩳0.05)。与OLT组比较,OLT+H组肝脏病理损伤程度明显减轻(P㩳0.05),ALT、AST和MDA水平明显降低而T-SOD活性显著升高(P㩳0.05),Caspase-3、Cyt-c、LC3-II、Beclin-1的蛋白表达以及自噬体数目均显著降低(P㩳0.05),凋亡指数也明显减低(P㩳0.05),但p53磷酸化程度升高(P㩳0.05)。OLT+H+3-MA组与OLT+H组比较,各项损伤指标均显著降低,Caspase-3、Cyt-c、LC3-II、Beclin-1的蛋白表达及自噬体数目均显著降低同时凋亡指数也明显减低(P㩳0.05),而p53磷酸化程度的差异无统计学意义(P㧐0.05)。结论:饱和氢盐水后处理可有效缓解移植肝缺血再灌注损伤的程度;其机制与饱和氢盐水通过上调p53磷酸化抑制肝移植诱导的细胞自噬,减轻细胞凋亡程度有关。
【学位授予单位】：天津医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R614
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，本文编号：1155635
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