PLA2G16经MAPK通路促进骨肉瘤转移

发布时间：2017-11-19 04:08

  本文关键词：PLA2G16经MAPK通路促进骨肉瘤转移

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【摘要】：研究目的骨肉瘤是儿童和青少年最常见的原发性恶性骨肿瘤,具有高度肺转移倾向,其5年生存率不足20%。因此,深入了解骨肉瘤转移机制,对骨肉瘤治疗意义重大。PLA2G16定义为第XVI磷脂酶A2,前期研究发现其过表达与骨肉瘤患者肺转移及临床不良预后相关,但PLA2G16是如何促进转移的具体机制尚未阐明。本研究旨在探讨PLA2G16调控骨肉瘤侵袭转移的相关功能及机制研究。研究方法1、应用实时荧光定量PCR和Western blot检测骨肉瘤细胞系中PLA2G16的表达,选择Saos2和MG63细胞系进行体外细胞功能学实验。2、构建慢病毒过表达PLA2G16的骨肉瘤稳转细胞株,使用MTT、细胞划痕实验、Transwell小室等分别检测细胞的增殖、迁移和侵袭能力。3、应用过表达PLA2G16载体、小RNA干扰技术转染骨肉瘤细胞,改变PLA2G16的表达后,使用Western blot检测不同处理条件下p-Erk1/2、Erk1/2、p-m TOR、m TOR、p-Akt和Akt等经典下游信号通路表达情况。4、应用实时荧光定量PCR检测35例骨肉瘤原发病灶冰冻组织,其中无转移患者18例,存在肺转移者17例。5、根据以上实验结果,应用IHC方法检测骨肉瘤组织芯片中88例患者PLA2G16和p-ERK1/2表达水平,评价PLA2G16和p-ERK1/2基因表达情况与临床病理特征及预后的关系。研究结果1、实时荧光定量PCR和Western blot结果示,HOS细胞系中PLA2G16表达量明显高于Saos2和MG63细胞系。与空白载体对比,应用细胞转染技术使Saos2和MG63过表达PLA2G16,可以增强骨肉瘤细胞增殖、迁移和侵袭能力。2、Saos2和MG63细胞系过表达PLA2G16,在常规培养及胎牛血清隔夜饥饿刺激条件下均能明增加ERK1/2磷酸化水平。HOS细胞系中敲除PLA2G16表达,相应地显著降低p-Erk1/2表达水平,提示MAPK的激活是PLA2G16的一个下游信号通路。3、实时荧光定量PCR结果分析示:转移性骨肉瘤患者原发病灶中PLA2G16mRNA相对表达量(均值+标准误:3.65±0.60)明显高于无转移组织样本(均值+标准误:2.49±0.69),其均值是非转移组的1.47倍。IHC结果分析:PLA2G16+与p-ERK1/2+表达存在相关性(P=0.002)。PLA2G16和p-ERK1/2表达与骨肉瘤患者肺转移均存在相关性(P0.05),但与患者年龄、性别、肿瘤位置及组织分型无统计学意义(P0.05)。4、骨肉瘤肺转移患者PLA2G16和p-ERK1/2阳性率(75.8%vs 41.8%,P=0.002;81.8%vs 54.5%,P=0.010)均高于无转移者,差异具有统计学意义。PLA2G16和p-ERK1/2 ROC曲线下面积分别为0.670、0.636,当两基因结合分析时ROC曲线下面积为0.706。5、PLA2G16和p-ERK1/2都是骨肉瘤患者OS及MFS预后因素。当二者表达综合分析时,PLA2G16+p-ERK1/2+组的5年生存率OS(51.1%)和MFS(44.7%)最差,PLA2G16-、p-ERK1/2-(85.4%和85.7%,P=0.020,P=0.016)组生存率预后最好,PLA2G16-、p-ERK1/2+;PLA2G16+、p-ERK1/2-组5年OS(61.5%)和MFS(54.1%)预后适中(P0.05)。研究结论PLA2G16通过激活MAPK信号通路增强骨肉瘤细胞系增殖、侵袭和转移能力,PLA2G16可能成为骨肉瘤患者判断预后及治疗的一个潜在靶点。PLA2G16和p-ERK1/2两者都是预测骨肉瘤肺转移的潜在生物标记物,当两个基因综合分析时,具有预测价值的累加效应。
【学位授予单位】：天津医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R738.1

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本文编号：1202243