VEGF-a增强BMP9介导MSCs成骨分化及机制的研究

发布时间：2017-12-24 08:47

  本文关键词：VEGF-a增强BMP9介导MSCs成骨分化及机制的研究　出处：《重庆医科大学》2016年硕士论文　论文类型：学位论文

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【摘要】：骨折、骨缺损以及骨不连是临床骨科常见疾病,作为现阶段最佳的治疗方法之自体骨移植然而也存在其明显缺点(增加手术时间、失血、取材有限、增加患者痛苦等)。因此,如何应用组织工程的理论和技术研究一种或者多种强有力的成骨诱导因子变得非常重要。间充质干细胞(mesenchymal stem cells,MSCs)作为组织工程人工骨中理想的种子细胞,如何有效地促进MSCs向成骨方向分化是组织工程研究热点。本研究旨在主要研究血管内皮生长a(vascular endothelial growth factor-a,VEGF-a)增强骨形态发生蛋白9(bone morphogenetic protein9,BMP9)介导MSCs成骨分化以及机制的研究。本研究采用半定量RT-PCR、免疫细胞化学染色(ICC)、Western blot、碱性磷酸酶(ALP)活性检测与染色、茜素红S染色、体内异位成骨实验、Micro-CT(μ-CT)三维成像以及组织切片染色等实验方法。首先,检测VEGF-a的内源性表达以及重组腺病毒adVEGF-a外源性表达情况;其次,检测VEGF-a对BMP9介导MSCs成骨分化早晚期成骨标志物活性指标ALP、OPN、OCN以及钙盐沉积的影响;然后,利用VEGF-a重组腺病毒通过体内实验,分析VEGF-a对BMP9介导MSCs异位成骨的影响;最后,利用PI3K/Akt抑制剂(LY294002)对VEGF-a影响BMP9介导MSCs成骨分化进行机制分析。结果显示,VEGF-a在MSCs中(MEFs、C3H10T1/2、C2C12以及MC3T3E1)均有表达,但内源性表达均很低;VEGF-a能协同增强BMP9介导MEFs成骨分化的早晚期成骨标志物的活性;在异位成骨实验中,VEGF-a能增加BMP9介导MEFs异位成骨活性,能明显增加骨体积,提高成骨活性,但骨密度却有所下降;VEGF-a协同增强BMP9介导MEFs成骨分化过程中能明显激活PI3K/Akt信号通路。应用PI3K/Akt抑制剂(LY294002)能明显抵消这种协同作用。综上结果提示,VEGF-a能明显协同增强BMP9介导MSCs成骨分化,可能通过PI3K/Akt信号途径来调节BMP9介导MSCs成骨分化。
【学位授予单位】：重庆医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R687

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本文编号：1327687