血管外支撑载药平台系统在大鼠自体移植静脉模型中的应用研究

发布时间：2017-12-26 12:07

  本文关键词：血管外支撑载药平台系统在大鼠自体移植静脉模型中的应用研究　出处：《安徽医科大学》2016年硕士论文　论文类型：学位论文

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【摘要】：目的冠状动脉旁路移植术(CABG)是治疗冠心病(CHD)的主要手段之一,而术后移植静脉再狭窄严重影响了桥血管的通畅率和患者预后。单纯的血管外支撑物和血管外局部用药对预防移植静脉内膜增生及管腔狭窄都有积极明确的效果,本课题组提出将二者进行复合形成全新理念的血管外支撑载药平台系统应用于大鼠自体颈静脉动脉移植模型中,模拟CABG术后病理生理过程进行研究,旨在验证新理念的可行性,为移植静脉再狭窄的治疗提供新思路和新方法。方法将72 SD大鼠(雌雄不拘,周龄10-12周,体重220-280g),随机分为6组:假手术组(sham group,S)、对照组(control group,C)、胶水组(α-cyanoacrylate,α-CA)、雷帕霉素组(Rapamycin,RPM)、DMSO组(二甲基亚砜)及SB203580组,每组12只大鼠。假手术组仅模拟手术过程,进行颈外静脉游离,侧枝结扎,不断血管,不行移植;对照组行同侧颈静脉-颈动脉移植;胶水组行同侧颈静脉-颈动脉移植,移植静脉外涂抹α-CA胶;雷帕霉素组行同侧颈静脉-颈动脉移植,移植静脉外涂抹α-CA胶与雷帕霉素复合物;DMSO行同侧颈静脉-颈动脉移植,移植静脉外涂抹DMSO,移植静脉外涂抹α-CA胶,DMSO移植前1小时灌胃;SB203580组行同侧颈静脉-颈动脉移植,移植静脉外涂抹DMSO(内含SB203580,5mg/kg),移植静脉外涂抹α-CA胶,DMSO(内含SB203580,5mg/kg)移植前1小时灌胃;应用改良“CUFF”法进行建模。血清ELISA共分4个点进行检测:T0:术前,T1:术后即刻,T2:术后36小时,T3:处死日,术后4周。ELISA法进行ET-1及TNF-α的检测。术后4周处死实验大鼠,肉眼观察移植静脉的变化,取新鲜桥血管固定保存后,进行HE染色,通过显微镜及计算机图像处理软件观察测定内、中和外膜增生情况;进行αSMA免疫组织化学染色,观测血管平滑肌细胞增殖及迁移情况;进行RT-PCR技术测定移植静脉αSMA的表达。结果各组手术均成功,术后4周处死大鼠时对照组移植静脉周围有新鲜肉芽组织产生、不同程度的扩张、管壁增厚水肿稍僵硬;凡涂抹胶水组皆可观察到:胶水未降解,移植静脉周围有少量肉芽组织且易分离,与周围组织分界清晰,未见明显扩张,颜色鲜艳。术前及术后即刻两个时间点上,各组ET-1水平相当,术后36小时及术后4周各组水平开始出现差异:术后36小时及术后4周胶水组、雷帕霉素组及SB组低于对照组水平,差异有统计学意义(P0.05);雷帕霉素组术后4周、SB组术后36小时及4周水平低于胶水组,差异有统计学意义(P0.05)。SB组和雷帕霉素组血清TNF-α水平于术后即刻缓慢上升,余各组水平于术后即刻缓慢下降,胶水组于术后36小时、雷帕霉素组于术后即刻、SB组于术后即刻、36小时和4周高于相对应点的对照组水平,差异有统计学意义(P0.05)。术后4周移植静脉HE染色后通过计算机图像分析系统进行分析:内膜:SB组厚度低于对照组、胶水组、雷帕霉素组及DMSO组,差异有统计学意义(P0.05);胶水组、雷帕霉素组、DMSO组及SB组的厚度均低于对照组,差异有统计学意义(P0.05);雷帕霉素组和SB组厚度均低于胶水组,差异有统计学意义(P0.05)。中膜:对照组厚度高于假手术组,差异有统计学意义(P0.05);胶水组、雷帕霉素组和DMSO组厚度低于对照组,差异有统计学意义(P0.05)。外膜:对照组厚度高于假手术组,差异有统计学意义(P0.05);雷帕霉素组厚度低于对照组,差异有统计学意义(P0.05);SB组厚度低于对照组、胶水组及DMSO组,差异有统计学意义(P0.05)。αSMA免疫组织化学染色可见假手术组术后4周内膜及外膜可见少量阳性细胞;对照组术后4周内中外膜均可见大量阳性细胞表达;胶水组和DMSO组可见中等量阳性细胞表达,以外膜居多;SB组和雷帕霉素组内膜阳性细胞表达少,外膜有中等量的表达;可见对照组大量平滑肌细胞迁移致内膜并增生,胶水组可减少内膜平滑肌细胞增生,平滑肌细胞向外膜迁移,SB组合雷帕霉素组药物干预后可明显降低内膜平滑肌细胞的增生,平滑肌细胞向外膜迁移。术后4周移植静脉标本行RT-PCR检测αSMA表达,SB组、雷帕组、胶水组及DMSO组均低于对照组,差异有统计学意义(P0.05),SB组和雷帕组均低于胶水和DMSO组,差异有统计学意义(P0.05)。结论α-CA胶作为血管外支撑物应用于大鼠移植静脉模型中,对减轻移植静脉内膜及中膜的增生、提高通畅率效果确切有效。SDP平台下雷帕霉素作为血管外局部用药应用于大鼠移植静脉模型中,减轻移植静脉内膜增生,提高通畅率效果确切有效。SDP平台下P38MAPK抑制剂SB203580作为血管外局部用药应用于大鼠移植静脉模型中,减轻移植静脉内膜和外膜的增生,提高通畅率效果确切有效。移植静脉血管外支撑载药平台系统(SDP系统)应用于大鼠移植静脉模型中减轻内、中及外膜增生,提高移植静脉通畅率确切有效,充分证实了全新理念的血管外支撑载药平台系统作用效果确切,具有可行性,为移植静脉再狭窄的治疗提供新思路和新方法。
【学位授予单位】：安徽医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R654.2

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本文编号：1337178