肝硬化肝癌手术区域血流预阻断的研究及MAPK通路蛋白作用机制探讨

发布时间：2018-01-30 15:49

本文关键词： 肝细胞癌肝硬化区域血流预阻断丝裂原活化蛋白激酶　出处：《北京协和医学院》2015年博士论文　论文类型：学位论文

【摘要】：目的：众多研究认为血流预阻断法对肝切除术中缺血再灌注损伤具有保护作用,然而目前大多数研究对象为非硬化肝脏患者,针对肝细胞癌合并肝硬化患者的研究较少,而且阻断方式几乎均为第一肝门阻断法(Pringle)。考虑到血流预阻断研究存在的问题以及区域血流阻断的优势,我们拟在前期研究基础上,探讨区域血流预阻断(regional ischemic preconditioning,RIP)对肝硬化肝细胞癌患者肝切除术中缺血再灌注损伤是否具有保护作用,并从血流预阻断的信号交汇点——丝裂原活化蛋白激酶(mitogen activated protein kinase, MAPK)信号传导通路中各亚蛋白的活化情况来进一步探索其作用及理论机制。方法：首先纳入54例行剖腹肝切除的肝细胞癌患者,包括区域血流预阻断组15例和传统区域血流阻断组39例,回顾性分析两组临床资料,包括术中出血量、术后肝功能、并发症率、住院时间等,初步观察区域血流预阻断(RIP)是否具有保护作用。而后建立大鼠70%肝脏缺血再灌注损伤模型和血流预阻断模型,将28只SD雄性大鼠分为血流预阻断组、缺血再灌注组及假手术组,进行术后复灌2h、6h及12h血清生化指标的检测及肝组织HE染色,并分别应用免疫组化和Western blotting检测各组MAPK通路亚蛋白——-JNK、p38、ERK磷酸化水平的变化。并开展前瞻非随机对照研究,纳入2014年5月至2014年12月行剖腹肝切除的72例合并肝硬化肝细胞癌患者,区域血流预阻断组23例、传统区域血流阻断组49例,分析两组临床资料并应用HE染色法观察肝脏形态学改变,免疫组化和Western blotting检测肝脏血流阻断前及复灌30min MAPK通路蛋白磷酸化水平的变化。结果：1、回顾性研究发现区域血流预阻断组术中中位出血量300ml,少于区域血流阻断组(400ml,P=0.039),区域血流预阻断组术后仅有1例(6.7%)患者输血,明显少于区域血流阻断组[17例(43.6%),P=0.010]。术后第3、5天,区域血流预阻断组患者凝血酶原活动度均高于区域血流阻断组(均P0.05)。未发现两组患者术后肝功能、住院时间、并发症率、肠道通气时间的差异(均P0.05)。术后一周内,区域血流预阻断组有5例(33.3%)患者丙氨酸氨基转移酶水平恢复正常,明显高于区域血流阻断组[1例(2.7%),P=0.006]。2、动物实验发现血流预阻断组复灌各时期转氨酶水平均低于缺血再灌注组,且肝细胞坏死范围变小,炎细胞浸润程度减轻。磷酸化JNK和磷酸化p38染色定位于肝细胞,而磷酸化ERK定位于肝窦内皮细胞。血流预阻断组三个复灌时期JNK和p38磷酸化水平均低于缺血再灌注组,以复灌6h和12h尤为明显(均P0.05)；而ERK磷酸化水平明显高于缺血再灌注组(均P0.05)。3、临床前瞻性研究发现区域血流预阻断组术后中位输血量为400ml,区域血流阻断组为1200ml(P=0.015),其余阳性及阴性结果同前期研究相仿。磷酸化p38染色定位改变,主要于肝窦内皮细胞,磷酸化ERK和磷酸化JNK与大鼠肝脏定位相同。区域血流预阻断组复灌30min时ERK磷酸化水平明显升高(P0.001),而p38和JNK磷酸化水平均显著下降(均P0.001)。结论：区域血流预阻断(RIP)对合并肝硬化肝细胞癌患者肝切除术中缺血再灌注损伤具有一定程度的保护作用,可能在减少术中出血、术后输血、升高术后凝血酶原活动度、加快肝功能早期恢复等方面优于区域血流阻断法。暂未发现区域血流预阻断(RIP)降低患者术后转氨酶、缩短患者手术时间、并发症率、术后住院时间及肠道通气时间。区域血流预阻断(RIP)可能通过升高ERK磷酸化水平、降低JNK和p38磷酸化水平以影响MAPK各亚通路的活性而产生保护作用。复灌期ERK磷酸化水平升高可能影响肝窦内皮细胞从而发挥保护作用,p38磷酸化水平降低可能在不同复灌时长影响肝细胞或肝窦内皮细胞,而JNK磷酸化水平降低可能主要对肝细胞产生保护作用。
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【学位授予单位】：北京协和医学院
【学位级别】：博士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R735.7;R657.31

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