PRP与TSC共混物对兔跟腱病动物模型中Ⅰ、Ⅲ型胶原及MMP-1表达的实验研究

发布时间：2018-02-12 09:37

  本文关键词： 富血小板血浆 肌腱干细胞 肌腱病 动物模型 实验研究　出处：《成都体育学院》2017年硕士论文　论文类型：学位论文

【摘要】：目的:通过观察PRP与TSC共混物对兔跟腱病动物模型中肌腱组织I、Ⅲ型胶原及MMP-1的含量表达情况,探讨PRP与TSC共混物治疗肌腱病的作用机理,为肌腱病的治疗寻求新的思路和安全有效的治疗方法,并为其在临床应用提供强有力的理论依据。方法:选取40只新西兰大白兔作为实验对象,适应性喂养1周后,随机分为分为模型组(32只)和空白对照组(8只)。模型组动物参照相关文献造模,在兔左跟骨附着点距离约2.0cm处注射PGE2 300ng/0.2ml,1周1次,共4次,建立兔跟腱肌腱病动物模型;空白对照组注射等量医用生理盐水。4周后从模型组中随机抽取8只,与空白对照组在肌骨超声下对比分析造模效果,将模型组所有32只造模成功的大白兔再次随机分为四组,A实验组(共混物组)、B对照组(TSC组)、C对照组(PRP组)与D模型对照组,每组各8只。动物模型稳定后,共混物组(A组)予以PRP及TSCs共混物1ml左跟腱局部注射,3周1次,共2次;TSCs组(B组)予第三代肌腱干细胞以1*104/ml的密度由1ml PBS重悬,左跟腱注射,3周1次,共2次;PRP组(C组)予自体富血小板血浆1ml局部左跟腱治疗,3周1次,共2次;模型对照组(D组)于同一时间点给予等量生理盐水注射。治疗6周后,处死动物,收集标本。收集肌腱组织制作切片并进行染色,在普通光学显微镜下观察肌腱组织,比较各组间半定量评分的差异。收集适量肌腱组织,用ELISA法测定各组肌腱纤维组织中MMP-1表达情况,比较各组间的差异。应用qRT-PCR技术对肌腱组织中I、Ⅲ型胶原mRNA表达情况进行检测,比较各组间的差异。结果:(1)多项半定量评分标准评分结果:D组最高,A组最低。B/C/D三组与A组比较,差异具有统计学意义(P0.05),B组与C组比较,差异无统计学意义(P0.05),B组与D组比较,差异具有统计学意义(P0.05);C组与D组比较,差异具有统计学意义(P0.05)。表明PRP、TSC及PRP与TSC共混物三者对跟腱病修复均有不同程度的修复作用,其中以PRP与TSC共混物效果最好。(2)Elisa法测定MMP-1表达含量结果:A组与空白对照组比较,差异无统计学意义(P0.05)。B、C、D三组与空白对照组比较,含量表达有统计学意义(P0.05)。A组与B、C、D三组比较,差距均有统计学意义(P0.05)。B组与C组比较,差异无统计学意义(P0.05),B组与D组比较,差异有统计学意义(P0.05)。C、D两组组间比较,差异有统计学意义(P0.05)。(3)荧光定量PCR中I、Ⅲ型胶原表达测定:A、B、C、D四组I型胶原m RNA表达相较于空白对照组均有不同程度的增高,差异均有统计学意义(P0.05)。其中以A组表达最高,D组表达最低,B、C两组表达在A、D两组之间。A组其含量与B、C、D三组比较差异均有统计学意义(P0.05);B组含量与C组比较差异无统计学意义(P0.05),与D两组比较差异有统计学意义(P0.05);C组含量与D组比较差异具有统计学意义(P0.05)。参与造模的四组Ⅲ型胶原mRNA表达相较于空白对照组也有不同程度的增高,差异均有统计学意义(P0.05)。其中以A组表达最高,D组表达最低,B、C两组表达在A、D两组之间。A组其含量与B、C、D三组相比差异均有统计学意义(P0.05);B组含量与C组比较,无统计学意义(P0.05),与D两组相比,差异有统计学意义(P0.05);C组含量与D组比较,差异有统计学意义(P0.05)。结论:(1)本实验采用局部注射PGE2的化学造模法诱发建立兔跟腱病动物模型,其造模方式简单易行,安全易控制,稳定性高。(2)本实验采用Landesberg法二次离心全血细胞收集PRP,操作简便,易于推广,收集到的PRP浓度高。(3)PRP与TSC共混物能够恢复肌腱纤维排列,减轻炎性细胞浸润,减轻肌腱细胞异常增多及细胞核变形或碎裂。(4)PRP与TSC共混物能够促进肌腱胶原中I、Ⅲ型胶原mRNA表达增加,减轻因MMP-1对I型胶原降解所致的机械性能及生物力学性能降低。(5)PRP与TSC共混物能够下调肌腱细胞中MMP-1表达,抑制了肌腱细胞基质及胶原降解的恶性循环,从而达到延缓肌腱病炎性反应及退行性改变,抑制其病变进程。
[Abstract]:Objective: through the observation of PRP and TSC blends of rabbit Achilles tendon disease animal model in tendon tissue I content, type III collagen and the expression of MMP-1, to explore the mechanism of PRP and TSC blends with tendon disease, seek treatment method and a safe and effective new treatment for tendon disease, and to provide a strong in the theoretical basis of clinical application. Methods: 40 New Zealand white rabbits were selected as experimental subjects. After 1 weeks of feeding, randomly divided into model group (32 rats) and control group (8 rats). The animal model group with reference to the relevant literature model, the distance of about 2.0cm injection of PGE2 300ng/0.2ml in attachment the rabbit left calcaneus, 1 times in 1 weeks, a total of 4 times, the establishment of rabbit tendon disease animal model; the control group was injected with physiological saline after.4 weeks were randomly selected from 8 rats in the model group, and control group in the muscle and bone ultrasound contrast analysis of the model. The will 妯″瀷缁勬墍鏈，

本文编号：1505326