非去极化肌肉松弛药加重炎症反应的机制研究

发布时间：2018-02-16 02:36

本文关键词： α7烟碱型乙酰胆碱受体 RIC-3 炎症反应非去极化肌肉松弛药　出处：《上海交通大学》2015年博士论文　论文类型：学位论文

【摘要】：已知机体存在胆碱能抗炎通路(CAP),即迷走神经释放乙酰胆碱与免疫细胞膜上的α7乙酰胆碱受体(α7-nAChR)结合,可抑制炎症因子的释放,减轻炎症反应。已有证据表明,非去极化肌肉松弛药能与α7-nAChR结合并抑制其功能。因此我们推测非去极化肌肉松弛药可与免疫细胞膜上的α7-nAChR结合,加重炎症反应。目的从以下方面证实非去极化肌肉松弛药可加重炎症反应,并探讨其机制：探讨不同浓度尼古丁对表达在HEK293细胞上的α7烟碱型乙酰胆碱受体的刺激作用,观察不同浓度的非去极化肌肉松弛药对表达在HEK293细胞上的α7烟碱型乙酰胆碱受体的阻断作用。观察非去极化肌肉松弛药逆转尼古丁抑制LPS刺激体外培养人巨噬细胞分泌TNF-α的作用。研究非去极化肌肉松弛药升高内毒素血症大鼠全身、肝脏和脾脏组织TNF-α含量。方法构建α7烟碱型乙酰胆碱受体和RIC-3质粒,通过RT-PCR、western blot和免疫荧光技术获得HEK293细胞表达α7烟碱型乙酰胆碱受体的表达结果。采用钙成像技术观察不同浓度尼古丁对构建表达在HEK293细胞上的α7烟碱型乙酰胆碱受体的刺激强度。采用α7烟碱型乙酰胆碱受体和RIC-3共转染HEK293细胞以获得在HEK293细胞上表达的功能性α7烟碱型乙酰胆碱受体,采用钙成像技术研究非去极化肌肉松弛药对α7烟碱型乙酰胆碱受体的抑制作用。体外培育人巨噬细胞,观察甲基牛扁亭碱(MLA)和不同类型非去极化肌肉松弛药对尼古丁抑制脂多糖(LPS)诱导刺激巨噬细胞分泌肿瘤坏死因子α (TNF-α)和白介素10(IL-10)的作用。采用ELISA方法来检测细胞培养液中TNF-α和IL-10水平。构建内毒素血症的大鼠模型,观察不同类型非去极化肌肉松弛药对大鼠血清、肝脏和脾脏中TNF-α水平的影响。采用ELISA法检测大鼠全身、肝脏和脾脏TNF-α含量。结果免疫荧光显示HEK293细胞上可以表达α7-nAChR, RT-PCR和western blot分别从mRNA和蛋白水平证实RIC-3和α7-nAChR共转染HEK293细胞。钙成像证明单纯α7-nAChR转染HEK293细胞并不能表达功能性α7-nAChR通过钙成像表明RIC-3可以促进HEK293细胞上功能性α7-nAChR的表达。通过钙成像观察到非去极化肌肉松弛药浓度范围在lnM-100nM,仍可以完全阻断30μM尼古丁对表达在HEK293细胞上的功能性α7-nAChR激动作用。免疫荧光显示人巨噬细胞上天然表达α7-nAChR。ELISA法检测证实采用α7-nAChR拮抗剂甲基牛扁亭碱(MLA)、非去极化肌肉松弛药均可以逆转1μM尼古丁对LPS刺激人巨噬细胞的TNF-α分泌的抑制作用(P0.05),但IL-10水平并未受到影响(P0.05)。在大鼠内毒素血症的动物模型上,采用不同类型非去极化肌肉松弛药持续静脉输注的大鼠血清、肝脏和脾脏组织中TNF-α含量较生理盐水对照组明显升高,有统计学差异(P0.05)。结论RIC-3能促进在HEK293细胞上表达功能性α7烟碱型乙酰胆碱受体,功能性α7烟碱型乙酰胆碱受体可表达在HEK293细胞上。非去极化肌肉松弛药能抑制尼古丁对表达在HEK293细胞上的功能性α7-nAChR的激动作用。非去极化肌肉松弛药能逆转尼古丁对LPS刺激人巨噬细胞的TNF-α分泌的抑制作用。但IL-10水平并未受到影响。静脉持续输注非去极化肌肉松弛药能加重内毒素血症大鼠炎症反应。综上所述,非去极化肌肉松弛药通过阻断α7烟碱型乙酰胆碱受体加重机体炎症反应。
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【学位授予单位】：上海交通大学
【学位级别】：博士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R614

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