人、猪、大鼠来源网织层真皮组织形态学及材料学表征的对比性研究

发布时间：2018-02-24 06:48

本文关键词： 猪大鼠人真皮材料表征顺应性　出处：《山东大学》2015年硕士论文　论文类型：学位论文

【摘要】：研究背景：临床实践中常用脱细胞真皮基质作为真皮的替代物用于皮肤缺损的重建和修复。异体来源的人脱细胞真皮基质是真皮缺损患者真皮修复与再生的“金标准”,但由于异体皮肤来源有限,并且成品价格较高,限制了其在临床实践中的广泛应用。故制备动物来源的异种脱细胞真皮基质为解决该问题的关键。近些年针对猪及大鼠脱细胞真皮基质的研究一直为研究热点,但两者材料学性能和效果的差异报道较少。本课题组前期研究发现猪边腹部网织层真皮质地柔软,脱细胞处理后与成纤维细胞共培养,细胞浸润良好。故本研究拟在前期研究基础之上将猪边腹部及大鼠背部网织层与人网织层真皮进行组织形态学、材料学表征比较,为异种脱细胞真皮基质的制备提供材料学及方法学选择依据。研究目的：针对脱细胞真皮种属来源的选择,采用实验室前期研究的边腹部猪真皮,结合组织形态学、生物力学、傅里叶红外光谱扫描、热分析等手段,从形态学和物理学角度,进一步阐明猪及大鼠真皮作为异种脱细胞真皮基质材料与人真皮的差异。为异种脱细胞真皮基质种属选择提供材料学及方法学依据。研究方法：1实验标本来源：成年男性全层皮肤标本3例。4-5月龄健康雄性白色家猪6头；9周龄清洁级雄性Wistar大鼠6只。2样品的制备：家猪及大鼠去毛后,各分别切取边腹部、背部全层皮肤标本。人全层皮肤标本3例为自愿捐献。3组皮肤标本均用鼓式取皮机制取网织层真皮。用于组织学染色的标本用多聚甲醛固定后,按常规制作组织蜡块,组织切片机切片。用于生物力学测试、傅里叶红外光谱扫描、热分析的标本进行真空冷冻干燥处理。3实验步骤及观测指标：(1)大体观察：通过肉眼观察及触摸比较3组样本的质地。(2)生物力学测试：将真空冷冻干燥后的样品裁成80 mm×5 mm规格的力学检测试件,复水后,进行单轴拉伸实验,根据实验结果进行相应计算及统计学分析。(3)苏木素-伊红染色：将石蜡切片按常规进行苏木素-伊红染色,显微照相后,用图像分析软件进行如下测量：①测量胶原纤维束直径。②测量白色空白区域面积占整个图片面积的百分比。(4)苦味酸-天狼星红染色：组织切片经天狼星红染色后,用偏振光显微镜照相,并用图像分析软件分析I、III型胶原纤维含量及其比值。(5)傅里叶红外光谱扫描：样品真空冷冻干燥后,压片法制样,用傅里叶红外光谱仪进行傅里叶红光谱扫描。(6)热分析：样品真空冷冻干燥后,用同步热分析仪进行热重分析和差示扫描量热分析,根据实验结果用作图软件Origin 8.0做导数热重曲线。研究结果：1大体观察：猪边腹部真皮毛孔密集、粗大,质地较人和大鼠稍僵硬,伸展性稍差。大鼠真皮质地细腻、柔软,毛孔细小。人真皮质地居中,毛孔稀疏,伸展性较大。2生物力学测试： 3组样品复水效果良好。猪真皮组(P=0.44)、大鼠真皮组(P=0.36),与人真皮组比较,杨氏模量差异无显著性意义。3苏木素-伊红染色：(1)光镜下观察：猪网织层真皮胶原纤维束粗大,排列紧密；大鼠网织层真皮胶原纤维束较纤细,排列疏松。与猪真皮组相比,大鼠真皮组织形态与人更为接近。(2)测量结果：猪真皮胶原纤维束直径与人比较差异无显著性意义(P=0.34)；大鼠真皮胶原纤维束比人真皮胶原纤维束略细(P0.05)。间隙率测量结果显示,猪真皮较人排列紧密(P0.01)；大鼠与人近似(P=0.17)。4苦味酸-天狼星红染色：猪真皮Ⅲ型胶原含量较少,Ⅰ、Ⅲ型胶原之比大于人真皮(P0.05),而大鼠真皮与人真皮比较差异无显著性意义(P=0.72)。5热分析：在热重曲线和导数热重曲线38-200℃范围内,人真皮的失重速率最快(11.58±0.80),猪其次(11.33±2.02),大鼠最慢(10.07±2.83)。差示扫描量热曲线显示猪真皮与人真皮相似,大鼠真皮与人真皮差异较大。6傅里叶红外光谱扫描：酰胺带宽度(例如酰胺Ⅰ带和酰胺Ⅱ带)比较,猪宽于人,大鼠与人近似。酰胺A峰强度比较,猪、大鼠均强于人,尤以大鼠为甚。结论：猪边腹部网织层真皮胶原纤维束直径及热分析结果与人接近,取皮面积较大,在单块较大面积脱细胞真皮基质的制作方面具有较好的应用前景；大鼠背部网织层真皮胶原纤维束排列与人类似,Ⅰ、Ⅲ型胶原含量及其比值也接近于人,热稳定性较好,在较小面积的脱细胞真皮基质制作时其临床效果可能优于猪边腹部网织层真皮。
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【学位授予单位】：山东大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R622

【参考文献】