脊髓水平神经元限制性沉默因子在瑞芬太尼诱发术后痛觉过敏中的作用

发布时间：2018-02-25 06:42

  本文关键词： 切口痛 瑞芬太尼 痛觉过敏 术后持续性疼痛 MRSF MOR　出处：《南京大学》2015年硕士论文　论文类型：学位论文

【摘要】：目的 探讨在瑞芬太尼痛觉过敏切口痛模型及皮肤／肌肉切口牵拉模型中脊髓神经元限制性沉默因子(NRSF)的作用。方法 第一部分：7-8周龄的健康清洁级成年雄性昆明小鼠56只,体重20～25 g,按随机数字表法分为7组(n=8)：空白对照组(C组)、切口痛组(I组)、切口+瑞芬太尼组(IR组)、NRSF反义寡核苷酸组(NAS组)、切口+NRSF反义寡核苷酸组(I+NAS组)、切口+瑞芬太尼+NRSF反义寡核苷酸(IR+NAS组)和切口+瑞芬太尼+NRSF错义寡核苷酸组(IR+NMS组)。各组均在造模前每天同一时间行鞘内穿刺给药,连续给药3 d。C组、Ⅰ组和IR组鞘内注射人工脑脊液5μl,NAS组、I+NAS组和IR+NAS组鞘内注射NRSF反义寡核苷酸10 μg, IR+NMS组鞘内注射NRSF错义寡核苷酸10μg,均为1次/d,连续3 d。于末次鞘内注射后30min时,C组和NAS组皮下输注生理盐水0.4 ml,Ⅰ组和I+NAS组制备切口痛模型,同时皮下输注生理盐水0.4 ml,IR组、IR+NMS组和IR+NAS组制备切口痛模型,同时皮下输注瑞芬太尼(0.04 mg/kg),30 min泵完。各组分别于造模前24 h(基础值)、术后2h、6h、24h和48 h检测术侧热缩足反射潜伏期(Paw withdrawal thermal latency, PWTL)及机械缩足反射阂值(Paw mechanical withdrawal threshold, PMWT),各组均取3只老鼠断头处死,分离L3-5节段脊髓腰膨大处,Western blot法测定NRSF、MOR的蛋白表达。第二部分：56只雄性SD大鼠,4～6周龄,体重180～200 g,采用随机数字表法,分为两组：假手术组(S组,n=20)和模型组(M组,n=36)。两组分别于造模前(base)、造模后第4d、7d、10d、14d每天相同时间行痛行为学测试并与相应时点每组各取12只小鼠断头处死,分离L3-5脊髓节段左侧腰膨大处,用Western blot法测定NRSF、MOR的蛋白表达。M组剩余24只小鼠随机分为M1、M2和M3组,每组8只。S组剩余8只老鼠和M1、M2、M3组造模前连续3 d,每天同一时间行鞘内穿刺给药。S组和M1组小鼠注射人工脑脊液,M2组小鼠注射浓度为10 μg/pl的NRSF错义寡核苷酸,M3组小鼠注射浓度为10 μg/μl的NRSF反义寡核苷酸,注药容积为10μl,每天给药1次。S、M1、M2和M3组在造模前(base)和造模后第4d、7d、14d行痛行为学测试并在造模后第14d再次测定脊髓水平NRSF、MOR的蛋白含量。结果第一部分：与C组比较,I组、IR组、I+NAS组、IR+NMS组和IR+NAS组术后2 h、6 h、24 h和48 h时PWMT和PWTL降低(P0.05), NAS组各时点PWMT和PWTL差异无统计学意义(P0.05)；与I组比较,IR组和IR+NMS组术后2 h、6 h、24 h和48 h时PWMT和PWTL降低(P0.05), I+NAS组各时点PWMT和PWTL差异无统计学意义(P0.05)；与IR组比较,IR+NMS组各时点PWMT和PWTL差异无统计学意义(P0.05),IR+NAS组术后2 h、6 h、24 h和48 h时PWMT和PWTL升高(P0.05)。第二部分：与S组相比,M组大鼠术后4d、7d、10 d、14d时点痛行为学指标机械缩足阈值(PWMT)明显降低(P0.05)；M组脊髓背角NRSF蛋白表达水平明显增高(P0.05),MOR蛋白表达水平逐渐降低(P0.05)。与M1组和M2相比,给药期间M3组大鼠机械缩足阈值升高(P0.05)。鞘内给药后,M3组大鼠脊髓水平NRSF蛋白表达减少(P0.05), MOR蛋白表达增多(P0.05)。鞘内注射人工脑脊液对大鼠疼痛行为学无明显影响(P0.05)。结论鞘内预先注入NRSF反义寡核苷酸能够明显改善瑞芬痛敏小鼠和SMIR大鼠的痛行为；脊髓水平NRSF及MOR蛋白表达在瑞芬痛敏小鼠没有明显差异,在SMIR大鼠表达明显。
[Abstract]:Objective to investigate the remifentanil hyperalgesia model of incisional pain and skin incision / muscle stretch spinal cord neuron restrictive silencer factor model (NRSF) function. Methods: in the first part, healthy 7-8 week old adult male 56 Kunming mice, weighing 20~25 g, according to the random number table method divided into 7 groups (n=8): control group (group C), incisional pain group (I group), incision + remifentanil group (IR group), NRSF antisense oligonucleotide group (NAS group), incision +NRSF antisense oligonucleotide group (I+NAS group), remifentanil incision + +NRSF antisense oligonucleotide (IR+NAS group) and incision + remifentanil +NRSF missense oligonucleotides group (IR+NMS group). Each group before modeling every day at the same time puncture intrathecal administration, continuous administration of 3 d.C group, group I and group IR intrathecal injection of artificial cerebrospinal fluid 5 L, NAS group, I+NAS group and IR+NAS group, intrathecal injection of NRSF antisense oligonucleotides 10 g, IR+NMS group 闉樺唴娉ㄥ皠NRSF閿欎箟瀵℃牳鑻烽吀10渭g,鍧囦负1娆，

本文编号：1533411