骨髓间充质干细胞源性微囊泡作用于软骨细胞NF-kB信号传导通路机制的研究
本文选题：SD大鼠充质干细胞 切入点：骨髓微囊泡 出处：《山西医科大学》2016年硕士论文 论文类型：学位论文
【摘要】：目的:1.学会体外培养SD大鼠的骨髓间充质干细胞(bone marrow mesenchymal stem cells,BMSCs),研究并完善骨髓间充质干细胞源性微囊泡(bone marrow mesenchymal stem cells-derived microvesicles,BMSCs-MVs)的分离、提取以及鉴定的方法;2.研究BMSCs-MVs对软骨细胞的调控作用,探讨它在NF-k B途径信号通路中的调控机制;方法:1.于体外培养并适时传代SD大鼠的BMSCs;2.从体外培养的SD大鼠的BMSCs中通过超速离心提取并扩增BMSCs-MVs,进行相应的细胞学和形态学鉴定;3.于体外培养并传代SD大鼠的软骨细胞,并进行相应的细胞学和形态学鉴定,为之后实验提供部分来源;4.分组将BMSCs-MVs与SD大鼠软骨细胞共培养,经适时传代后,提取总RNA,逆转录后进行RT-PCR检测相关因子,利用SPSS 16.0软件进行结果的统计学分析。进而探究BMSCs-MVs对软骨细胞在增殖和凋亡方面的影响,以及BMSCs-MVs作用于软骨细胞信号通路NF-k B转导的机制;结果:本实验结果采用SPSS16.0软件进行处理与分析,结果采用(均数±标准差)来表示,不同实验处理目标基因的相对表达值分别采用独立样本的t检验进行分析,软件处理后的结果(p0.05),意义为此次实验数据差异有统计学意义。1.各实验组和空白组进行比较,促凋亡的p53基因的表达量减少(p0.05);实验组内进行比较,BMSCs-MVs+抑制剂EVP4593组与BMSCs-MVs组相比p53基因的表达量减少(p0.05);BMSCs-MVs+抑制剂EVP4593组与抑制剂EVP4593组相比p53基因的表达量减少(p0.05);同实验组在不同时间点(4h与24h)相互比较,基因p53表达量无显著差异(p0.05);2.MVs组与空白组对比,抑制凋亡基因Bcl-2的表达量均显著增加(p0.05);抑制剂EVP4593组及BMSCs-MVs+抑制剂EVP4593组分别与空白对照组相比,抑制凋亡基因Bcl-2的表达量均显著减少(p0.05);BMSCs-MVs+抑制剂EVP4593组与MVs组相比Bcl-2基因表达量显著减少(p0.05);BMSCs-MVs+抑制剂EVP4593组与抑制剂EVP4593组相比Bcl-2基因表达量显著减少,(p0.05);相同实验组的不同时间点(4h与24h)相互比较Bcl-2基因表达量无显著差异(p0.05);结论:1.BMSCs-MVs具有减少软骨细胞中促凋亡因子p53表达和增加抑凋亡因子Bcl-2表达的作用;2.BMSCs-MVs对软骨细胞的作用是多种通路实现的,NF-kb通路在此过程中的权重尚不明确。
[Abstract]:Objective to learn to culture bone marrow mesenchymal stem cells from SD rats in vitro, and to study and perfect the isolation of bone marrow mesenchymal stem cells-derived microvesicles BMSCs-MVsof bone marrow mesenchymal stem cells (BMSCs). To study the regulatory effect of BMSCs-MVs on chondrocytes and explore its regulatory mechanism in NF-k B pathway. Methods 1. BMSCs-MVs2. BMSCs-MVs2. BMSCs-MVs2 was isolated from SD rats by ultracentrifugation and amplified by ultracentrifugation, and the corresponding cytological and morphological identification was performed. The chondrocytes of SD rats were cultured and subcultured in vitro. The corresponding cytological and morphological identification were carried out to provide a partial source for the later experiment. BMSCs-MVs and SD rat chondrocytes were co-cultured in groups. After timely passage, total RNAs were extracted, and the related factors were detected by RT-PCR after reverse transcription. The effects of BMSCs-MVs on the proliferation and apoptosis of chondrocytes and the mechanism of BMSCs-MVs acting on NF-k B transduction in chondrocyte signaling pathway were analyzed by SPSS 16.0 software. Results: the results of this experiment were processed and analyzed by SPSS16.0 software. The results were expressed by (mean 卤standard deviation). The relative expression values of target genes in different experiments were analyzed by t-test of independent samples. The result of the software processing was p0.05, meaning that the difference of the experimental data was statistically significant. 1. The experimental group and the blank group were compared. The expression of p53 gene in BMSCs-MVs inhibitor EVP4593 group was lower than that in BMSCs-MVs group, and the expression of p53 gene in BMSCs-MVs inhibitor EVP4593 group was lower than that in EVP4593 group, compared with that in BMSCs-MVs group; the expression of p53 gene in BMSCs-MVs inhibitor EVP4593 group was lower than that in EVP4593 group, and the expression level of p53 gene in BMSCs-MVs inhibitor EVP4593 group was lower than that in EVP4593 group. At different time points (4 h and 24 h), There was no significant difference in the expression of p53 gene between MVs group and control group. The expression of inhibiting apoptosis gene Bcl-2 in EVP4593 group and BMSCs-MVs inhibitor EVP4593 group were significantly higher than that in control group. The expression of Bcl-2 gene in BMSCs-MVs inhibitor EVP4593 group was significantly lower than that in MVs group, and the expression of Bcl-2 gene in EVP4593 group was significantly lower than that in EVP4593 group, and the same experimental group was different. Conclusion: 1. BMSCs-MVs can reduce the expression of apoptosis-promoting factor p53 and increase the expression of anti-apoptotic factor Bcl-2 in chondrocytes. 2. The effects of BMSCs-MVs on chondrocytes are multiple pathways. The weight of the implemented NF-kb path in this process is unclear.
【学位授予单位】：山西医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R684
【相似文献】
相关期刊论文 前10条
1 何清义,李起鸿,许建中,杨柳;转化软骨细胞与正常软骨细胞的生物特性比较[J];中国临床康复;2002年10期
2 王小虎;卫小春;陈维毅;;软骨细胞力学特性的研究进展[J];中华医学杂志;2006年21期
3 沈雁,唐毅,李斯明,钟灿灿,梁佩红;碱性成纤维细胞生长因子与透明质酸对培养兔软骨细胞的作用[J];中华创伤杂志;2000年06期
4 林建华,吴朝阳,许卫红;不同培养时间软骨细胞的生物学特性[J];福建医科大学学报;2000年02期
5 张文涛,卢世璧,黄英,李楠;软骨细胞形态对其缝隙连接的影响[J];中国创伤骨科杂志;2000年04期
6 杨物鹏,许建中;软骨细胞培养及其调控[J];中国矫形外科杂志;2000年08期
7 杨彩荣;软骨细胞培养及其调控因素研究进展[J];国外医学.耳鼻咽喉科学分册;2002年03期
8 张文涛,卢世璧,黄英,李楠;软骨细胞形态、表型与胞间通讯研究[J];中国修复重建外科杂志;2002年05期
9 杨运东 ,陈基长;不同施加因素对软骨细胞的影响[J];中医正骨;2002年09期
10 张艳,柴岗,崔磊,刘伟,曹谊林;不同类型人软骨细胞体外生物学特性比较[J];中华实验外科杂志;2003年06期
相关会议论文 前10条
1 张春雷;孙美乐;姚洪菊;;抗氧化剂和透明质酸对软骨细胞的保护作用[A];中国细胞生物学学会第五次会议论文摘要汇编[C];1992年
2 任宏造;;软骨细胞的超生结构病理[A];第六次全国电子显微学会议论文摘要集[C];1990年
3 张杨;崔丽;郭悦;孙晓雷;李秀兰;;滑膜细胞微环境对软骨细胞生物学活性的影响[A];第十八届全国中西医结合骨伤科学术研讨会论文汇编[C];2011年
4 柏涛;;骨髓间充质干细胞诱导表达软骨细胞表型的研究进展[A];玉溪市第三届二次骨科学术研讨会论文汇编[C];2009年
5 周红辉;万福生;;人骨髓间充质干细胞分化为软骨细胞的实验研究[A];华东六省一市生物化学与分子生物学学会2006年学术交流会论文集[C];2006年
6 王正辉;吴宝俊;许珉;;壳聚糖/明胶复合不同软骨细胞体外构建组织工程软骨的实验研究[A];全国耳鼻咽喉头颈外科中青年学术会议论文汇编[C];2012年
7 马剑雄;马信龙;张华锋;张园;王志钢;杨阳;;生物力学因素在激素性股骨头坏死中对软骨细胞的作用[A];2009第十七届全国中西医结合骨伤科学术研讨会论文汇编[C];2009年
8 李建华;黄建荣;康奕飞;许继德;涂永生;;体外诱导人骨髓间充质干细胞分化为软骨细胞的研究[A];中南地区第六届生理学学术会议论文摘要汇编[C];2004年
9 石印玉;曹月龙;冯伟;郑昱新;石瑛;王翔;;补肾、柔肝中药对软骨细胞生物功能的影响[A];2004'中华中医药科技成果专辑[C];2004年
10 许道荣;金丹;肖庭辉;余斌;;长时间拉伸应变对软骨细胞生化环境的影响[A];第20届中国康协肢残康复学术年会论文选集[C];2011年
相关重要报纸文章 前10条
1 聂翠蓉;英科学家从成人骨骼中找到软骨干细胞[N];科技日报;2008年
2 吴一福;西安交大：用人胎儿软骨细胞培养成功软骨组织工程种子细胞[N];中国医药报;2006年
3 中文;人体软骨举足轻重[N];广东科技报;2000年
4 刘霞;英用患者组织细胞成功培育出再生软骨[N];科技日报;2010年
5 保健时报特约记者 方序;体外“养”一块软骨补膝盖[N];保健时报;2011年
6 记者 张可喜;培养软骨细胞[N];新华每日电讯;2002年
7 健康时报记者 李海清;软骨破了打“补丁”[N];健康时报;2009年
8 杨春;药物增高不可信[N];大众卫生报;2005年
9 黄枫 谢国平;中医药治疗膝骨关节炎实验研究进展[N];中国中医药报;2006年
10 记者 何屹;英国用干细胞成功培育出软骨组织[N];科技日报;2005年
相关博士学位论文 前10条
1 王晓凤;自噬在软骨发育不全与软骨生成中的作用与机制研究[D];第三军医大学;2015年
2 王胜楠;杜仲苷对IL-1β诱导的软骨细胞分解代谢和凋亡的影响及其作用机制[D];南方医科大学;2015年
3 张元民;MiR-145在原发性膝关节骨性关节炎软骨中的表达及其意义[D];天津医科大学;2015年
4 张龙强;整合素β1促进GIT1表达而影响软骨细胞增殖凋亡的研究[D];山东大学;2015年
5 马中希;周期性张应力对大鼠生长板软骨细胞的增殖和凋亡作用[D];华中科技大学;2015年
6 刘艳;BMP-2在骨性关节炎中表达的意义及其诱导凋亡及增殖的研究[D];吉林大学;2016年
7 梁锦前;瘦素对于人OA软骨细胞RhoA/LIMK1/Cofilin细胞骨架调控通路的作用[D];中国协和医科大学;2010年
8 杨运东;骨炎定对体外培养软骨细胞的影响[D];广州中医药大学;2001年
9 张e，
本文编号：1557060
本文链接：https://www.wllwen.com/yixuelunwen/waikelunwen/1557060.html
