U6和let-7a作为定量检测miRNAs的内参在大鼠软骨中稳定性的比较

发布时间：2018-03-27 07:12

  本文选题：软骨　切入点：内参　出处：《西安交通大学学报(医学版)》2017年04期

【摘要】：目的比较U6和let-7a两种内参在RT-qPCR方法检测大鼠股骨头软骨样本microRNAs(miRNAs)的稳定性。方法取软骨生成过程的新生(D0)、断乳(D21)、性成熟(D42)3个时间节点的雌性近交系DA大鼠股骨头软骨,提取总RNA,用RT-qPCR方法分别在U6和let-7a两种内参体系下,检测miR-1、-25、-26a、-140、-146a、-150、-181a、-195、-223、-337等的表达,并与课题组前期获得的二代测序绝对定量结果进行比较,综合评价两种内参的稳定性。结果在D42样本中U6(P=0.045)、let-7a(P=0.021 5)的相对值出现了显著性差异;在两种内参体系中miR-26a、-140、-223、-337的表达趋势相同,miR-1、-146a差异无统计学意义,miR-25、-150、-181a、-195都出现了显著性差异(P0.05)。综合二代测序绝对定量结果比较,let-7a稳定性优于U6。结论 let-7a稳定性优于U6,更适合做软骨miRNA定量的内参。
[Abstract]:Objective to compare the stability of U6 and let-7a in the RT-qPCR method for the detection of femoral head cartilage in rats. Methods the femoral head cartilage of female inbred strain DA rats with three time nodes of chondrogenesis (D0, D21, D42) was obtained. The total RNAs were extracted, and the expression of miR-1r-25r-25r-26afen -140- 146abu-150-181afen -195-223N-337 was detected by RT-qPCR method in U6 and let-7a systems, respectively, and compared with the absolute quantitative results obtained by the second generation sequencing in the early stage of the study group, and compared with the results obtained in the early period of the study group. The stability of the two internal parameters was comprehensively evaluated. Results there was significant difference in the relative values of U6P0. 045 and 7aP0. 021 5 in D42 samples. In the two internal reference systems, the expression trend of miR-26ahu-140- 223N-337 was the same. There was no significant difference in the expression of miR-25- 150-1a-181a ~ (-195). The stability of let-7a was better than that of U6.Conclusion the stability of let-7a is better than that of U6, and the stability of let-7a is better than that of U6.Conclusion the stability of let-7a is better than that of U6.Conclusion the stability of let-7a is better than that of U6.Conclusion the stability of let-7a is better than that of U6. The internal parameters of cartilage miRNA were measured.
【作者单位】： 西安交通大学医学部附属红会医院急诊科;西安交通大学医学部基础医学院生物化学与分子生物学系;环境与疾病相关基因教育部重点实验室;
【基金】：国家自然科学基金资助项目(No.81371986,81301598) 中国博士后科学基金(No.2014T70928,2013M530427) 中央高校基本研究基金(No.xjj2015073)~~
【分类号】：R68

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本文编号：1670535