降钙素基因相关肽对血清饥饿条件下MC3T3-E1成骨细胞凋亡和自噬的影响

发布时间：2018-03-28 00:11

  本文选题：成骨细胞　切入点：降钙素基因相关肽　出处：《第三军医大学》2017年硕士论文

【摘要】：一、研究背景在骨折愈合过程中,成骨细胞是骨修复和骨重建最为重要的细胞之一,主要依赖于微环境中连绵不绝的营养供应及促生存信号才能维持其正常的生理功能;当骨组织发生病变或者损伤导致营养因子供应受到限制时,成骨细胞将会发生超出正常生理状态的凋亡率,由此对骨的重塑造成了严重的影响。研究发现神经系统可以调节骨组织的各项生理功能,降钙素基因相关肽(CGRP)作为广泛分布于神经系统中的神经递质,对骨形成和骨吸收起着重要的作用。本课题组在前期研究中已经证实CGRP在颌骨骨折的愈合过程中起着重要的促进作用。成骨细胞表面存在CGRP受体,CGRP通过结合受体发挥对成骨细胞活性的直接调节作用,CGRP对成骨细胞的作用分子机制已有大量研究。近期研究证明CGRP能够通过抑制成骨细胞的凋亡进而抑制骨的丢失,对成骨细胞具有潜在的保护作用,但具体机制尚不完全清楚。自噬(autophagy)是一种细胞应对不利环境的一种自我保护机制,是将受损或异常的细胞器和蛋白质通过双层膜结构转运发至溶酶体降解循环再利用的过程。凋亡(apoptosis)是细胞受基因控制的一种主动的有序的死亡方式。骨折愈合过程中同时伴随着凋亡与自噬的发生,两者如何互相作用共同促进骨折愈合的具体机制尚不清楚。本实验旨在验证CGRP对饥饿条件下成骨细胞抗凋亡作用,发现其对饥饿条件下成骨细胞自噬活性的影响作用,再对两者相互的关系进行了初步的探索。首次从自噬入手,试图进一步揭示CGRP对成骨细胞发挥保护作用的机制。二、研究方法成骨细胞于血清饥饿条件(α-MEM培养基、0%FBS、100U/ml青-链霉素)下培养12h、24h后通过流式细胞术和Western blotting分别检测其凋亡率和自噬相关蛋白LC3的表达。自噬抑制剂3-MA预处理成骨细胞细胞1h后血清饥饿培养24h,采用流式细胞术检测细胞凋亡。在血清饥饿条件下加入不同浓度的CGRP培养24h,采用Western blotting检测LC3蛋白和P62蛋白,筛选出对自噬优势作用浓度;通过加入CGRP后不同时间段采用Western blotting检测LC3蛋白,筛选出CGRP作用于饥饿条件下成骨细胞自噬作用的优势作用时间段。CGRP作用于血清饥饿条件下培养成骨细胞24h,采用流式细胞术检测细胞凋亡,并采用共聚焦激光显微镜观察MDC染色细胞自噬体和LC3免疫荧光染色。在血清饥饿条件下使用自噬抑制剂抑制3-MA预处理细胞后加入CGRP培养24h,采用流式细胞术检测细胞凋亡。三、研究结果1.血清饥饿会诱导成骨细胞凋亡率升高,通过Western blot检测显示血清饥饿会诱导成骨细胞LC3Ⅱ/Ⅰ比值升高。2.自噬抑制剂3-MA预处理可以增加血清饥饿条件下成骨细胞凋亡率。3.CGRP可以抑制血清饥饿诱导成骨细胞的凋亡。CGRP作用于血清饥饿条件下成骨细胞24h,随着加入CGRP浓度的逐渐升高,LC3Ⅱ/Ⅰ比值差异逐渐上升,P62表达逐渐下降,在CGRP浓度为10-8mol/L是差异较为明显。CGRP作用于血清饥饿条件下成骨细胞不同时间段,在24h时LC3Ⅱ/Ⅰ比值差异最为明显。CGRP诱导血清饥饿条件下成骨细胞自噬体形成及LC3蛋白表达。4.自噬抑制剂3-MA预处理后可以增加血清饥饿条件下成骨细胞的凋亡率,CGRP则能部分逆转自噬抑制剂3-MA预处理后所致的血清饥饿条件下成骨细胞的凋亡。四、结论1.本研究验证血清饥饿会诱导成骨细胞凋亡及自噬活性的升高,抑制血清饥饿条件下成骨细胞的自噬活性会诱导凋亡率的升高。2.本研究证实CGRP抑制血清饥饿诱导成骨细胞的凋亡的同时诱导血清饥饿条件下成骨细胞自噬活性增强。本研究证实CGRP能部分逆转自噬抑制所致的血清饥饿条件下成骨细胞的凋亡,可能通过诱导成骨细胞自噬活性。
[Abstract]:In this study , calcitonin gene - related peptide ( CGRP ) plays an important role in bone formation and bone resorption .

【学位授予单位】：第三军医大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2017
【分类号】：R683

【相似文献】

相关期刊论文 前10条

1 唐孝明;裴福兴;李胜富;曾建成;张耀明;刘仲前;庞健;;雌激素对血清饥饿诱导成骨细胞凋亡基因表达的影响[J];中国康复理论与实践;2006年11期

2 邓展生;孙太存;向铁城;沈民仁;鞠洪斌;;胰岛素样生长因子-Ⅰ对血清饥饿引起成骨细胞增殖抑制的保护作用[J];医学临床研究;2006年11期

3 宋春娇,吕冰洁,张小玲,史忠诚,傅松滨,李璞,李钰;血清饥饿法用于细胞周期同步化的方法学研究[J];中国地方病学杂志;2003年04期

4 叶涛;徐浩;弓健;;不同甲状腺功能绝经前女性血清饥饿素与全身骨量、肌肉量、体重的相关分析[J];中国病理生理杂志;2010年07期

5 韩梅,温进坤,郑斌,聂磊;血清饥饿可诱导人血管平滑肌细胞再分化[J];中国生物化学与分子生物学报;2003年02期

6 邵晓云;徐绍业;;血清饥饿法处理胎儿成纤维细胞周期同步化的研究[J];中国现代医学杂志;2010年01期

7 唐孝明;裴福兴;沈彬;刘仲前;张耀明;庞健;;雌激素对血清饥饿诱导成骨细胞凋亡的影响[J];中国康复理论与实践;2006年02期

8 刘斐;;血清饥饿法对人牙髓细胞周期同步化的研究[J];口腔生物医学;2012年04期

9 刘斐;吴补领;高杰;黄欣;麻丹丹;陈婷;;血清饥饿法对人牙髓细胞周期同步化的研究[J];牙体牙髓牙周病学杂志;2011年02期

10 何陨;唐婉容;吴恙;王璐;游涛;;选择性雌激素受体调节剂对MC3T3-E1细胞生长分化的调节[J];第三军医大学学报;2012年16期

相关会议论文 前10条

1 谭德勇;赖建华;江燕;钱伟;余敏;李水冰;;一个血清抑制基因的克隆[A];中国生物化学与分子生物学会第八届会员代表大会暨全国学术会议论文摘要集[C];2001年

2 谢朝阳;祝其锋;;原花青素对Aβ_(25-35)诱导的血清饥饿培养PC12细胞凋亡保护作用的研究[A];第十次中国生物物理学术大会论文摘要集[C];2006年

3 陈旭;郭新云;徐松;张孟丽;金慧;邢美春;黄丹;任发亮;杜开和;鞠梅;李新宇;陈];周之海;顾恒;;血清饥饿处理对人角质形成细胞系HaCaT细胞自噬的调控效应研究[A];2013全国中西医结合皮肤性病学术年会论文汇编[C];2013年

4 赵国阳;徐又佳;;高铁培养环境对小鼠前成骨细胞MC3T3-E1增殖、分化的影响[A];中华医学会第七次全国骨质疏松和骨矿盐疾病学术会议论文汇编[C];2013年

5 祝其锋;谢朝阳;;p21、CDK4和E2F1在Aβ_(25-35)诱导血清饥饿培养PC12细胞凋亡中的意义[A];第十次中国生物物理学术大会论文摘要集[C];2006年

6 刘钰瑜;;卡托普利对MC3T3-E1细胞增殖、分化及Ⅰ型胶原mRNA表达的影响[A];中华医学会第六次全国骨质疏松和骨矿盐疾病学术会议暨中华医学会骨质疏松和骨矿盐疾病分会成立十周年论文汇编[C];2011年

7 刘钰瑜;姚卫民;徐道华;崔燎;;卡托普利对MC3T3-E1细胞增殖、分化及Ⅰ型胶原mRNA表达的影响[A];中华医学会第七次全国骨质疏松和骨矿盐疾病学术会议论文汇编[C];2013年

8 刘琴丽;孙树津;霍波;龙勉;;成骨细胞铺展形状和面积对其凋亡的影响[A];第九届全国生物力学学术会议论文汇编[C];2009年

9 郭海玲;赵咏芳;王翔;徐宇;段铁骊;詹红生;;人内皮细胞与成骨细胞共育系的建立及细胞功能的实验研究[A];中华医学会第三次骨质疏松和骨矿盐疾病中青年学术会议论文汇编[C];2011年

10 张克勤;李振华;Jenifer Rosser;Lynda;F．Bonewald;;成骨细胞向骨细胞分化后可能表达多种新蛋白[A];中华医学会第四次全国骨质疏松和骨矿盐疾病学术会议论文汇编[C];2006年

相关重要报纸文章 前4条

1 杨丽佳邋通讯员 周宁人;骨折不愈合缘于成骨细胞“爬不动”[N];健康报;2008年

2 杨丽佳邋周宁人;骨折不愈合 缘于成骨细胞“爬不动”[N];大众卫生报;2008年

3 杨建辉;雌三醇对成骨细胞保护作用的研究[N];中国中医药报;2004年

4 生命学院;俞立课题组在《科学》发文揭示自噬调控的重要机制[N];新清华;2012年

相关博士学位论文 前10条

1 张叶敏;泛素—蛋白酶体系统和细胞自噬对血清饥饿的3T3-L1脂肪细胞胰岛素敏感性的调控作用[D];武汉大学;2015年

2 董鑫;共培养条件下脂肪细胞脂毒性对成骨细胞影响的机制研究[D];第四军医大学;2014年

3 耿彬;ERK5信号通路在成骨细胞凋亡以及小鼠骨质疏松症发生中的作用[D];兰州大学;2016年

4 佟雁翔;力生长因子通过PI3K/AKT途径促进兔骨髓基质干细胞增殖及其向成骨细胞的分化[D];重庆医科大学;2015年

5 李明静;高迁移率族蛋白B1对成骨细胞迁移和增殖的影响及其作用机制[D];南方医科大学;2016年

6 朱冬冬;高糖对内皮—成骨细胞转分化的影响及机制探讨[D];东南大学;2016年

7 孙官文;低氧诱导因子-1α诱导的MG-63成骨细胞的凋亡分子机制研究[D];武汉大学;2015年

8 郑俊;Shp2成骨细胞靶向特定敲除小鼠动物模型的建立及其临床表型分析及致病机理研究[D];武汉大学;2014年

9 黄弘;利用成骨细胞特异性敲除小鼠研究C/EBPα在骨发育中的作用[D];重庆医科大学;2017年

10 徐凌;成骨生长肽对成骨细胞和骨髓基质细胞增殖分化影响的研究[D];四川大学;2006年

相关硕士学位论文 前10条

1 安洋;降钙素基因相关肽对血清饥饿条件下MC3T3-E1成骨细胞凋亡和自噬的影响[D];第三军医大学;2017年

2 刘薇;抗血管生成药物在血清饥饿及缺氧环境下对人乳腺癌细胞侵袭转移能力的影响[D];天津医科大学;2013年

3 徐进;血清饥饿下神经胶质瘤细胞对TRAIL耐受性变化的效应研究[D];北京理工大学;2015年

4 叶涛;不同甲状腺功能绝经前女性血清饥饿素与身体成份相关分析[D];暨南大学;2009年

5 万海英;血清饥饿条件下microRNA表达谱的变化及其功能研究[D];天津医科大学;2007年

6 刘中建;血清饥饿对U251细胞氧化磷酸化活性的影响及其分子机制研究[D];云南大学;2015年

7 张亚楠;a-TCP+DCPD+C_3S系骨水泥对MC3T3-E1细胞的影响[D];河南师范大学;2014年

8 郭新云;血清饥饿处理对人角质形成细胞系HaCaT细胞自噬的调控效应研究[D];天津医科大学;2013年

9 赵春芝;胰岛素和阿仑膦酸钠对高糖环境下MC3T3-E1增殖及凋亡的影响[D];山西医科大学;2010年

10 杨宇;δ阿片受体激活对血清饥饿致大鼠成骨细胞凋亡的影响及机制[D];辽宁医学院;2012年

，

本文编号：1673873