基因重组腺病毒载体与慢病毒载体转染兔骨髓间充质干细胞的对比

发布时间：2018-04-03 14:55

  本文选题：干细胞　切入点：腺病毒科　出处：《中国组织工程研究》2017年09期

【摘要】：背景:腺病毒载体和慢病毒载体均是较好的组织工程基因载体,两者在介导骨形态发生蛋白2转染兔骨髓间充质干细胞中的差异尚待探究。目的:比较腺病毒和慢病毒载体介导EGFP/骨形态发生蛋白2转染体外培养兔骨髓间充质干细胞的转导效率、持续时间及外源基因表达差异。方法:将第5代兔骨髓间充质干细胞分3组培养,A组以腺病毒载体介导EGFP/骨形态发生蛋白2(Ad-EGFP/BMP-2)转染细胞,B组以慢病毒载体介导EGFP/骨形态发生蛋白2(Lenti-EGFP/BMP-2)转染细胞,C组为未进行转染。转染24 h、48 h、72 h、1周、3周,检测EGFP基因表达;转染72 h后,免疫组织化学观察细胞骨形态发生蛋白2的表达;转染后72 h、1周、3周,Western blot检测骨形态发生蛋白2蛋白表达。结果与结论:(1)转染24 h后,A、B组可见EGFP表达,A组明显强于B组;转染48 h后,A、B组荧光进一步增强;转染72 h后,A组荧光强度近高峰,B组荧光持续增强。转染1周后,A组荧光强度开始下降,B组荧光强度仍然增强。转染3周后,A组荧光强度明显下降甚至消失,B组荧光强度有所下降,但仍然保持一定的表达。C组在各时间点均无EGFP表达;(2)A、B组胞浆均呈骨形态发生蛋白2阳性表达,C组呈阴性表达;(3)转染72 h后,A组骨形态发生蛋白2蛋白表达量强于B组;转染1周后,A组表达下降,B组表达增强并强于A组;转染3周后,A组表达微弱,B组持续表达且明显强于A组;(4)结果表明,相对腺病毒载体,慢病毒载体介导EGFP/骨形态发生蛋白2基因转染兔骨髓间充质干细胞在表达持续时间上具有一定的优势。
[Abstract]:Background: adenovirus vector and lentivirus vector are good tissue engineering gene vectors. The difference between them in bone morphogenetic protein-2 mediated transfection of rabbit bone marrow mesenchymal stem cells remains to be explored.Aim: to compare the transduction efficiency, duration and foreign gene expression of EGFP/ bone morphogenetic protein 2 (BMP 2) mediated by adenovirus and lentivirus vector in rabbit bone marrow mesenchymal stem cells (BMSCs) in vitro.The expression of EGFP gene was detected at 24 h, 48 h and 72 h after transfection, and the expression of bone morphogenetic protein-2 (BMP 2) was observed by immunohistochemistry after 72 h transfection, and the expression of bone morphogenetic protein 2 (BMP 2) was detected by Western blot at 1 week and 3 weeks after transfection.Results and conclusion 24 h after transfection, EGFP expression in group A was significantly higher than that in group B, fluorescence in group A was further enhanced 48 h after transfection, fluorescence intensity of group A was near peak after 72 hours of transfection.One week after transfection, the fluorescence intensity of group A began to decrease and that of group B was still enhanced.After 3 weeks of transfection, the fluorescence intensity of group A was significantly decreased or even decreased in group B.But there was no EGFP expression in group C at all time points. The expression of bone morphogenetic protein 2 in cytoplasm of group C was negative. The expression of bone morphogenetic protein-2 in group C was higher than that in group B 72 h after transfection. The expression of bone morphogenetic protein 2 in group A was higher than that in group B at 72 h after transfection, the expression of bone morphogenetic protein 2 in group A was higher than that in group B.After 1 week of transfection, the expression of down-expression in group A was enhanced and stronger than that in group A, and the expression of weakly expressed in group A was significantly stronger than that in group A after 3 weeks of transfection. The results showed that the expression of adenovirus vector was higher than that of group A.Lentivirus vector mediated EGFP/ bone morphogenetic protein-2 gene transfection into rabbit bone marrow mesenchymal stem cells has a certain advantage in expression duration.
【作者单位】： 桂林医学院附属医院急诊创伤外科;
【基金】：国家自然科学基金资助项目(31160199) 广西区自然科学基金资助项目(2014GXNSFAA118263)~~
【分类号】：Q78;R68

【相似文献】

中国期刊全文数据库 前10条

1 刘明,宁长富,刘莹;骨形态发生蛋白临床应用进展[J];山东医药;2002年11期

2 王雪,宋长征;骨形态发生蛋白-7的研究进展[J];生命的化学;2003年06期

3 刘永斌,王峰,荣威恒;骨形态发生蛋白的研究进展[J];畜牧与饲料科学;2005年04期

4 潘贵超;温建民;潘贵春;;骨形态发生蛋白-2的研究进展[J];中国中医骨伤科杂志;2006年06期

5 乌日汗;敖强;;骨形态发生蛋白研究进展[J];内蒙古民族大学学报(自然科学版);2011年02期

6 黄义德;吴金芸;徐轶彦;韩明;林政;;人骨形态发生蛋白4多拷贝表达盒的构建及其表达[J];福建师范大学学报(自然科学版);2011年06期

7 ;骨形态发生蛋白研究的新进展[J];重庆医科大学学报;1987年02期

8 刘昌乙，李晓勇，王纯;骨形态发生蛋白研究的某些进展[J];成都体育学院学报;1995年01期

9 饶亚兰,张杰,柳川,赵明;人骨形态发生蛋白-7在昆虫细胞中的表达[J];军事医学科学院院刊;2000年03期

10 牛建立,成杞润;骨形态发生蛋白在心血管系统的生理和病理意义[J];国外医学(生理、病理科学与临床分册);2000年04期

中国重要会议论文全文数据库 前10条

1 陈保立;葛鲁娜;王世立;韩金祥;;重组人骨形态发生蛋白-7工程菌的高密度培养[A];华东六省一市生物化学与分子生物学会2009年学术交流会论文摘要汇编[C];2009年

2 陈国庆;王军志;饶春明;;重组人骨形态发生蛋白-2质量标准的研究[A];中国生物工程学会第三次全国会员代表大会暨学术讨论会论文摘要集[C];2001年

3 周辉;詹旭;夏志敏;赵万军;何永江;;骨形态发生蛋白在大段同种异体骨移植中的表达[A];2008年浙江省骨科学学术年会论文汇编[C];2008年

4 安新玲;王志宇;刘肖帅;葛鲁娜;朱有名;韩金祥;王世立;;重组人骨形态发生蛋白-7抗体的制备(摘要)[A];华东六省一市生物化学与分子生物学会2009年学术交流会论文摘要汇编[C];2009年

5 栾丽菊;王珂;杨立元;杨磊;田珑;秦丽华;;骨形态发生蛋白在人类肿瘤组织中的表达[A];中国解剖学会第八届组织学与胚胎学教学与科研技术经验交流会论文摘要[C];2008年

6 徐毅;杨旭;姬彦辉;郭晓东;;骨形态发生蛋白2活性多肽药物的计算机辅助设计[A];中华医学会第三次骨质疏松和骨矿盐疾病中青年学术会议论文汇编[C];2011年

7 熊刚;胡侦明;;骨形态发生蛋白生物载体及其缓释系统的研究进展[A];玉溪市第三届骨科学术研讨会论文汇编[C];2007年

8 杨春瑜;杨明;杨春莉;赫美;曲敏;张帅;徐伟;陈凤莲;王萍;;骨形态发生蛋白-2分离纯化技术研究进展[A];2009食品科技(北京)论坛会议指南[C];2009年

9 夏胜利;戴\戎;汤亭亭;;神经切除对骨形态发生蛋白异位诱导成骨的影响[A];2005年上海市生物医学工程学会学术年会论文集[C];2005年

10 王雪;宋长征;;重组骨形态发生蛋白-7因子在骨损伤疾病治疗中的研究进展[A];第二届海峡两岸矫形外科学术研讨会论文集[C];2004年

中国重要报纸全文数据库 前2条

1 记者 张梅珍;骨不连研究又有进展[N];健康报;2001年

2 张中桥;卵磷脂可作重组人骨形态发生蛋白-2新载体[N];中国医药报;2005年

中国博士学位论文全文数据库 前8条

1 田科;装载骨形态发生蛋白4的腺病毒相关病毒诱导成骨的实验研究[D];郑州大学;2016年

2 李军;骨形态发生蛋白-2转染骨髓基质细胞的生物学特性和其骨诱导修复作用[D];第四军医大学;2004年

3 董军;重组骨形态发生蛋白-2与转化生长因子-β诱导颈椎后纵韧带骨化及其机制的研究[D];第二军医大学;2007年

4 夏远军;DSs/rh-BMP-2/CS复合微球的制备及成骨活性研究[D];南方医科大学;2013年

5 马真胜;骨形态发生蛋白（BMP4，，5，6，7）基因在骨折及骨病中表达规律的研究[D];第四军医大学;1995年

6 李晓燕;表达人骨形态发生蛋白-7的骨髓基质细胞修复骨缺损的实验研究[D];第二军医大学;2005年

7 郑园娜;骨形态发生蛋白（BMP）异源二聚体在诱导成骨发生及破骨发生的体外研究[D];浙江大学;2010年

8 酆波;骨形态发生蛋白7衍生多肽/壳聚糖/纳米羟基磷灰石/胶原复合材料修复骨缺损的实验研究[D];中南大学;2013年

中国硕士学位论文全文数据库 前10条

1 马兵;可降解重组人骨形态发生蛋白-2复合贴膜的研究[D];兰州大学;2015年

2 吴乃蓬;重组人胶原绑定骨形态发生蛋白2在大肠杆菌中的表达、纯化与复性[D];吉林大学;2016年

3 王思颖;辐照消毒与纳米微囊化对骨形态发生蛋白活性的影响研究[D];天津大学;2014年

4 熊绍虎;人骨形态发生蛋白-2在大肠杆菌中的高效表达[D];第一军医大学;2000年

5 许鉴;骨形态发生蛋白复合多孔钛铌合金试件的实验研究[D];中南大学;2012年

6 卢宏伟;骨形态发生蛋白2活性肽在体内体外诱导成骨的实验研究[D];华中科技大学;2010年

7 李阳;骨形态发生蛋白2和血管内皮生长因子基因在大鼠股骨骨不连中不同区域的动态表达[D];江苏大学;2010年

8 孙洋;骨形态发生蛋白4非复制腺病毒基因治疗大鼠胫骨缺损的实验研究[D];安徽医科大学;2007年

9 刘蕾;人骨形态发生蛋白-7成熟肽的表达及其生物学活性的初步研究[D];中国人民解放军军医进修学院;2007年

10 张明;晚期骨痂成骨治疗骨缺损过程中重组人骨形态发生蛋白-2对血管内皮生长因子的表达影响和作用分析[D];中国医科大学;2009年

本文编号：1705688