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基因重组腺病毒载体与慢病毒载体转染兔骨髓间充质干细胞的对比

发布时间:2018-04-03 14:55

  本文选题:干细胞 切入点:腺病毒科 出处:《中国组织工程研究》2017年09期


【摘要】:背景:腺病毒载体和慢病毒载体均是较好的组织工程基因载体,两者在介导骨形态发生蛋白2转染兔骨髓间充质干细胞中的差异尚待探究。目的:比较腺病毒和慢病毒载体介导EGFP/骨形态发生蛋白2转染体外培养兔骨髓间充质干细胞的转导效率、持续时间及外源基因表达差异。方法:将第5代兔骨髓间充质干细胞分3组培养,A组以腺病毒载体介导EGFP/骨形态发生蛋白2(Ad-EGFP/BMP-2)转染细胞,B组以慢病毒载体介导EGFP/骨形态发生蛋白2(Lenti-EGFP/BMP-2)转染细胞,C组为未进行转染。转染24 h、48 h、72 h、1周、3周,检测EGFP基因表达;转染72 h后,免疫组织化学观察细胞骨形态发生蛋白2的表达;转染后72 h、1周、3周,Western blot检测骨形态发生蛋白2蛋白表达。结果与结论:(1)转染24 h后,A、B组可见EGFP表达,A组明显强于B组;转染48 h后,A、B组荧光进一步增强;转染72 h后,A组荧光强度近高峰,B组荧光持续增强。转染1周后,A组荧光强度开始下降,B组荧光强度仍然增强。转染3周后,A组荧光强度明显下降甚至消失,B组荧光强度有所下降,但仍然保持一定的表达。C组在各时间点均无EGFP表达;(2)A、B组胞浆均呈骨形态发生蛋白2阳性表达,C组呈阴性表达;(3)转染72 h后,A组骨形态发生蛋白2蛋白表达量强于B组;转染1周后,A组表达下降,B组表达增强并强于A组;转染3周后,A组表达微弱,B组持续表达且明显强于A组;(4)结果表明,相对腺病毒载体,慢病毒载体介导EGFP/骨形态发生蛋白2基因转染兔骨髓间充质干细胞在表达持续时间上具有一定的优势。
[Abstract]:Background: adenovirus vector and lentivirus vector are good tissue engineering gene vectors. The difference between them in bone morphogenetic protein-2 mediated transfection of rabbit bone marrow mesenchymal stem cells remains to be explored.Aim: to compare the transduction efficiency, duration and foreign gene expression of EGFP/ bone morphogenetic protein 2 (BMP 2) mediated by adenovirus and lentivirus vector in rabbit bone marrow mesenchymal stem cells (BMSCs) in vitro.The expression of EGFP gene was detected at 24 h, 48 h and 72 h after transfection, and the expression of bone morphogenetic protein-2 (BMP 2) was observed by immunohistochemistry after 72 h transfection, and the expression of bone morphogenetic protein 2 (BMP 2) was detected by Western blot at 1 week and 3 weeks after transfection.Results and conclusion 24 h after transfection, EGFP expression in group A was significantly higher than that in group B, fluorescence in group A was further enhanced 48 h after transfection, fluorescence intensity of group A was near peak after 72 hours of transfection.One week after transfection, the fluorescence intensity of group A began to decrease and that of group B was still enhanced.After 3 weeks of transfection, the fluorescence intensity of group A was significantly decreased or even decreased in group B.But there was no EGFP expression in group C at all time points. The expression of bone morphogenetic protein 2 in cytoplasm of group C was negative. The expression of bone morphogenetic protein-2 in group C was higher than that in group B 72 h after transfection. The expression of bone morphogenetic protein 2 in group A was higher than that in group B at 72 h after transfection, the expression of bone morphogenetic protein 2 in group A was higher than that in group B.After 1 week of transfection, the expression of down-expression in group A was enhanced and stronger than that in group A, and the expression of weakly expressed in group A was significantly stronger than that in group A after 3 weeks of transfection. The results showed that the expression of adenovirus vector was higher than that of group A.Lentivirus vector mediated EGFP/ bone morphogenetic protein-2 gene transfection into rabbit bone marrow mesenchymal stem cells has a certain advantage in expression duration.
【作者单位】: 桂林医学院附属医院急诊创伤外科;
【基金】:国家自然科学基金资助项目(31160199) 广西区自然科学基金资助项目(2014GXNSFAA118263)~~
【分类号】:Q78;R68

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本文编号:1705688

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