NT-3-HUMSCs联合基因沉默SOCS3治疗SD大鼠脊髓损伤的实验研究

发布时间：2018-04-03 20:13

  本文选题：脊髓损伤　切入点：SOCS3　出处：《昆明医科大学》2015年硕士论文

【摘要】：[背景]脊髓损伤(SCI)是神经外科常见的危急症之一,为国际医学难题,近年来随着交通运输及建筑业的发展,脊髓损伤的发病率亦呈逐年增高的趋势。脊髓损伤具有高致残率和低治愈率的特点,SCI损伤后往往遗留截瘫、大小便失禁、行走困难等神经功能障碍,因此也丧失劳动能力,甚至丧失生活自理能力,不但给患者本人带来巨大的痛苦,同时也给家庭社会带来巨大的负担。神经再生困难是困扰医学界的难题之一,有必要深入研究SCI后神经再生。研究表明SCI损伤区域局部极为不利的微环境和胶质疤痕是神经再生的主要障碍。神经营养因子在神经再生和修复过程中一直扮演着举足轻重的重要作用,神经营养因子-3(NT-3)是神经营养因子家族重要成员之一,脊髓损伤后损伤区域自身分泌的营养因子不足,而且同时存在抑制神经营养因子发挥作用的因素, 细胞因子抑制蛋白3(SOCS3)是抑制内源性神经营养因子的关键分子之一,从而导致轴突再生困难。单一的治疗方式促进神经功能恢复作用有限,联合治疗是可能促进神经再生的策略,应用细胞移植不断的供给外源性神经营养因子改善损伤区域局部极为不利的微环境,同时应用基因沉默技术抑制阻碍神经营养因子发挥作用的因素,即联合内源性和外源性神经营养因子治疗脊髓损伤,有可能治疗脊髓损伤促进神经再生。[目的]联合siRNA技术抑制阻碍神经营养因子发挥作用的因素和利用基因转染技术来改善损伤区域的微环境,以此来达到促进神经再生修复的目的。[方法]①用贴壁法体外培养人体来源的脐带间充质细胞(HUMSC),同时进行分离,提纯和鉴定。②构建NT-3基因真核表达载体,利用基因转染技术将其转入HUMSC,构建NT-3- HUMSC细胞,体外检测其存活情况及NT-3表达情况。③查阅文献筛选作用于SOCS3的特异性靶点,进行序列同源性分析,设立阴性对照,设计并合成siRNA,同时在体外检测功能。④建立SD大鼠脊髓损伤模型分为为：Ⅰ.假手术组10只；Ⅱ.T12全脊髓横断损伤模型40只,随机分为4组,分别；生理盐水治疗组10只；siRNA + NT-3-HUMSCs治疗组10只；NT-3-HUMSCs治疗组10只；siRNA治疗组10只。对于假手术组,仅打开椎板,暴露脊髓,但不损伤脊髓。其他试验组术后6周横断损伤局部注射siRNA,7周后再次移植NT-3-HUMSCs、HUMSCs或NT-3。以上各组造模成功后,分别存活1,2月和3月进行运动功能评价和神经电生理监测。⑤对SD大鼠进行灌注固定和取材,观察局部胶质疤痕降解情况和轴突再生情况,同时运用RT-PCR和Western blot检测NT-3蛋白表达情况。实验技术路线图[结果]1)体外实验证实经构建的NT-3-HUMSCs表达神经营养因子3较HUMSCs明显增多且NT-3能够促进诱导人脐带基质细胞朝神经元方向分化。2) SOCS3-siRNA+NT-3-HUMSCs联合治疗SD大鼠脊髓损伤组BBB评分明显高于NT-3-HUMSCs和SOCS3-siRNA和假手术组。差异有统计学意义(p0.05)3) SOCS3-siRNA+NT-3-HUMSCs联合治疗SD大鼠脊髓损伤组爬网格实验表明神经功能恢复明显高于NT-3-HUMSCs和SOCS3-siRNA和假手术组。差异有统计学意义(p0.05)。4) siRNA + NT-3-HUMSCs治疗组较生理盐水治疗组横断脊髓空洞明显缩小(p0.05),差异显著5)追踪结果表明iRNA+NT-3-HUMSCs治疗组较生理盐水治疗组神经轴突生长明显。6)神经电生理检测损伤12周后治疗组P40潜伏期较假手术组缩短,siRNA + NT-3-HUMSCs治疗组较生理盐水治疗组比较潜伏期缩短明显,波幅升高明显,差异有显著意义(p0.05)。[结论]NT-3-HUMSCs联合基因沉默SOCS3可以改善外源性NT-3表达及SOCS3抑制作用增加内源性NT-3利用,改善局部微环境,从而达到促进损伤神经修复
[Abstract]:Neurotrophic factor - 3 ( NT - 3 ) plays an important role in promoting nerve regeneration .
2.T12 spinal cord transection injury model 40 rats were randomly divided into 4 groups , respectively ;
10 rats were treated with physiological saline ;
10 cases of siRNA + NT - 3 - HUMSCs treatment group ;
NT - 3 - HUMSCs treated group was 10 ;
The results showed that the expression of NT - 3 - HUMSCs and NT - 3 - HUMSCs could improve the expression of NT - 3 - HUMSCs .

【学位授予单位】：昆明医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R651.2

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本文编号：1706737