周期性张应力对大鼠生长板软骨细胞的增殖和凋亡作用

发布时间：2018-05-31 02:47

  本文选题：生长板 + 软骨细胞　； 参考：《华中科技大学》2015年博士论文

【摘要】：目的： 1.探讨不同强度下张应力对生长板软骨细胞的作用,对增值和凋亡的影响。并初步研究周期性张应力对生长板软骨细胞Hippo信号通路的影响。 2.检验大鼠跑台装置造大鼠骨关节炎模型,同时于对照组给予口服环孢素A观察药物干预组能否改善骨关节炎病变的程度。检测凋亡相关基因及蛋白的变化 3.建立大鼠运动动物模型,观察不同强度的运动量对生长板软骨的影响。 方法： 1.取大鼠生长板软骨细胞的分离培养,采用四点弯曲张力仪给予生长板软骨细胞不同强度应力刺激。用Annexxin V-FITC/PI染色免疫荧光观察细胞凋亡,并行流式细胞学检测细胞凋亡。行Real-time PCR和Western blot检测增殖和凋亡相关基因的表达和蛋白的变化。 2.采用大鼠跑台建立骨关节炎模型并同时设组给予免疫抑制剂CSA干预,用MR和microCT检测和评估骨关节炎模型,HE切片观察骨关节炎改变,Real-time PCR检测骨关节炎相关基因的表达,Western blot检测骨关节炎相关蛋白的表达。 3.采用大鼠跑台建立大鼠运动增殖模型,用microCT检测运动模型并用HE切片观察软骨增殖改变。行.Real-time PCR和Western blot检测增殖相关基因的表达和蛋白的变化。 结果 1.在较低的力学强度(2000μ)下生长板软骨细胞软骨细胞表达COL2基因以及COL2和SOX9蛋白表达量明显增加,而RUNX2基因和蛋白表达增加不明显。中等力学强度时(3000μ、4000μ),生长板软骨细胞RUNX基因和蛋白的表达量明显增加,而COL2基因以及COL2和SOX9蛋白表达量较未刺激细胞相比减少。在很高的力学强度刺激时(5000μ、6000μ)细胞MMP13及caspase9的基因表达上调,同时活化的caspase9蛋白表达量也增加。起保护作用的BCL2蛋白表达明显减少。随着应力刺激强度的不断增加,生长板软骨细胞凋亡不断增加。同时检测出在增殖和凋亡时YAP基因和蛋白的高表达。 2.高强度的跑台运动(大于30km)模型动物可检测出影像学早期的骨关节炎改变,HE切片测量软骨厚度减少,CASPASE9、MMP13、COL2、SOX9基因上调,活化CASPASE9蛋白表达增加,COL2、SOX9以及BCL2蛋白表达减少。CSA可减轻OA影像学表现,减轻骨关节炎程度。同时可降低凋亡相关蛋白的表达。 3.运动可以增加Ki67基因的表达量以及PCNA的基因和蛋白的表达量,并同时上调SOX9基因的表达和增加SOX9和COL2蛋白的表达量, 结论 1.较低的力学强度(2000μ)下生长板软骨细胞分化主要以软骨增殖趋势为主。而中等力学强度时(3000μ、4000μ),生长板软骨细胞主要以成骨分化趋势为主。很高的力学强度刺激时(5000μ、6000μ)细胞凋亡明显增加。生长板软骨细胞的增殖和凋亡可能与YAP的表达相关。 2.高强度的跑台运动(大于30km)可通过增加关节软骨机械应力导致大鼠OA的发生,骨关节炎的发生与软骨细胞凋亡密切相关。CSA对细胞凋亡有抑制作用,可降低凋亡相关蛋白的表达,减轻骨关节炎程度。 3.运动可以促进生长板软骨细胞的增殖,并且在适当的运动强度下,随着运动强度的增加,促进软骨细胞增殖的作用也在增加。
[Abstract]:Objective:
1. to investigate the effect of tensile stress on growth plate chondrocytes at different intensities, to influence the increment and apoptosis, and to investigate the effect of periodic tensile stress on the Hippo signaling pathway of growth plate chondrocytes.
2. the rat model of rat osteoarthritis was built by the rat running device. At the same time, the control group was given oral cyclosporine A to observe whether the drug intervention group could improve the degree of osteoarthritis. The changes of apoptosis related genes and proteins were detected.
3. a rat model of animal movement was established to observe the effect of different intensity of exercise on growth plate cartilage.
Method锛，

本文编号：1958015