SCAP重组腺病毒的构建及对软骨细胞增殖与凋亡的实验研究
本文选题：SCAP + 软骨细胞 ； 参考：《重庆医科大学》2016年硕士论文
【摘要】：目的构建固醇调节元件结合蛋白裂解激活蛋白(SREBP cleavage activating protein,SCAP)腺病毒,探讨其对ATDC5软骨干细胞增殖及凋亡的影响。为进一步研究SCAP基因的生物学功能奠定基础,也为探讨SCAP介导的脂代谢与骨关节炎的关系提供一定的实验基础和理论依据。方法应用AdEasyTM腺病毒载体系统,构建并包装Ad-SCAP和靶向SCAP的siRNA腺病毒siSCAP1和siSCAP2,RT-PCR和Western blot法检测其在ATDC5细胞中的表达。FCM检测SCAP重组腺病毒对ATDC5细胞增殖和凋亡的影响;Western blot检测SCAP重组腺病毒感染ATDC5细胞时,凋亡相关蛋白Cleaved Caspase-3,p-JNK的表达。结果成功构建重组腺病毒Ad-SCAP和Ad-siSCAP;Ad-SCAP处理组ATDC5细胞凋亡率明显增加(P0.05),增殖率明显降低(P0.05);Ad-si SCAP处理组ATDC5细胞增殖率明显增加(P0.05),凋亡率明显降低(P0.05)。结论ATDC5细胞中,过表达SCAP能促进其凋亡抑制增殖而减少SCAP的表达则抑制ATDC5细胞的凋亡、促进增殖。
[Abstract]:Objective to construct a steroid regulatory element binding protein lysation-activating protein (SREBP cleavage activating protein) adenovirus and to investigate its effect on proliferation and apoptosis of ATDC5 chondrocyte stem cells. It will lay a foundation for further study of the biological function of SCAP gene and provide a certain experimental and theoretical basis for the study of the relationship between lipid metabolism mediated by SCAP and osteoarthritis. Methods AdEasyTM adenovirus vector system was used. Construction and packaging of Ad-SCAP and siRNA adenovirus siSCAP1 and siSCAP2mRNA targeting SCAP were used to detect the expression of SCAP in ATDC5 cells by RT-PCR and Western blot. The effects of SCAP recombinant adenovirus on the proliferation and apoptosis of ATDC5 cells were detected. Western blot was used to detect SCAP recombinant adenovirus infection on ATDC5 cells. Expression of apoptosis-related protein Cleaved Caspase-3, p-JNK. Results the apoptosis rate of ATDC5 cells was significantly increased in the recombinant adenovirus Ad-SCAP and Ad-SCAP treated with Ad-SCAP, and the proliferation rate was significantly decreased in the ATDC5 cells treated with P0.05 and Ad-si SCAP. Conclusion overexpression of SCAP can promote apoptosis and inhibit proliferation of ATDC5 cells, while decreasing the expression of SCAP can inhibit apoptosis and promote proliferation of ATDC5 cells.
【学位授予单位】：重庆医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R684.3
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，本文编号：1983846
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