TRPV1受体对瑞芬太尼痛觉过敏大鼠脊髓胶质细胞的调控机制

发布时间：2018-06-06 01:03

本文选题：阿片类药物 + 瑞芬太尼　；参考：《天津医科大学》2017年硕士论文

【摘要】：目的瑞芬太尼是一种超短效μ阿片受体激动剂,具有较低的呼吸抑制和复苏延迟的风险。由于它是一种安全可靠、起效及复苏均较为迅速的镇痛药物而广泛应用于临床麻醉镇痛。然而,与其他阿片类药物相比,瑞芬太尼更易诱发痛觉过敏。瑞芬太尼诱发痛觉过敏(Remifentanil-induced hyperalgesia,RIH)是指在使用瑞芬太尼后很短时间内(60min)即发生,使手术后疼痛的发生率增加,引发人们的思考。近来研究表明,TRP通道是非选择性的阳离子四聚物通道,包括TRPC,TRPM,TRPV,TRPP,TRPML以及TRPA等多个家族。其中瞬时受体电位香草醛亚家族1(Transient receptor potential subtype V1,TRPV1)是一种电压门控Ca~(2+)通道,可被多种调控因子激活,包括低PH值(≤5.9),热刺激(42℃),内啡肽,内源性脂质及辣椒素,在伤害感受及神经炎症方面的关键作用。这些年来大量研究表明小胶质细胞对于免疫系统的调节具有重要的意义。其中对与神经病理性疼痛也有影响,小胶质细胞可调节神经免疫和突触的传递性。因此小胶质细胞对于疼痛的调节具有重要的作用。然而对于瑞芬太尼痛觉过敏确少有报道。本实验旨在通过建立瑞芬太尼痛觉过敏动物模型,观察是否会有TRPV1和小胶质细胞的改变,探讨瑞芬太尼诱发痛觉过敏的可能机制。并通过鞘内给予TRPV1抑制剂来预防术后瑞芬太尼诱发的痛觉过敏症状。为临床麻醉镇痛提供一定的理论依据。方法尾静脉置管成功的40只SD雄性大鼠随机分为4组(n=10):对照组(C组):经尾静脉置管持续输注生理盐水;瑞芬太尼组(R组):经尾静脉置管持续输注瑞芬太尼;切口痛组(I组):麻醉后建立切口痛模型,同时经尾静脉置管持续输注生理盐水;瑞芬太尼+切口痛组(R+I组):麻醉后建立切口痛模型,同时经尾静脉置管持续输注瑞芬太尼。生理盐水输注速度为0.1 mL·kg~(-1)·min~(-1),瑞芬太尼输注速度为1.2μg·kg~(-1)·min~(-1)。输注时间均为60min。使用智能热板仪分别于术前1天、术后2h、6h、24h、48h五个时间点进行热痛敏测定。当时间达到30秒时即终止测定以避免实验动物组织损伤。并在48h大鼠行为学测定结束后,处死取其腰L4~6节段背根神经节和脊髓。采用Western blot法测定背根神经节和脊髓TRPV1的表达变化;使用Elisa和Western blot技术测定大鼠脊髓TNF-α的表达变化;并使用免疫荧光法测定背根神经节TRPV1的表达变化以及脊髓小胶质细胞的状态及数量改变。鞘内置管成功的60只SD雄性大鼠随机分为6组(n=10):C组:鼠尾输注生理盐水,生理盐水输注速度为0.1 mL·kg~(-1)·min~(-1),输注时间为60分钟;并鞘内注射10μl DMSO;C+CPZ组:鼠尾输注生理盐,生理盐水输注速度为0.1mL·kg~(-1)·min~(-1),输注时间为60分钟;鞘内注射TRPV1拮抗剂CPZ 16μg/10μl;R+I组:做切口痛模型并输注瑞芬太尼,瑞芬太尼输注速度为1.2μg·kg~(-1)·min~(-1),输注时间为60分钟;R+I+CPZ3组:做切口痛模型并输注瑞芬太尼,瑞芬太尼输注速度为1.2μg·kg~(-1)·min~(-1),输注时间为60分钟;鞘内注射TRPV1拮抗剂CPZ16μg/10μl;CPZ1组:做切口痛模型并输注瑞芬太尼,瑞芬太尼输注速度为1.2μg·kg~(-1)·min~(-1),输注时间为60分钟;鞘内注射TRPV1拮抗剂CPZ 2μg/10μl;CPZ2组:做切口痛模型并输注瑞芬太尼,瑞芬太尼输注速度为1.2μg·kg~(-1)·min~(-1)输注时间为60分钟;鞘内注射TRPV1拮抗剂CPZ 8μg/10μl;使用智能热板仪分别于术前1天、术后2h、6h、24h、48h五个时间点进行热痛敏测定测定。结果PWL行为学结果表明,空白对照组(C组)、切口痛组(I组)、瑞芬太尼组(R组)和瑞芬太尼+切口痛组(RI组)四组在术前24小时无统计学差异(P0.05)。输注瑞芬太尼后2~48小时,C组各时间点痛阈值与输注瑞芬太尼前的基础痛阈值相比,没有统计学差异(P0.05);与对照组相比,切口痛组(I组)或瑞芬太尼组(R组)阈值显著降低,具有统计学意义(P0.01);与C组、R组I组相比,瑞芬太尼+切口痛组(RI组)降低,具有统计学意义(P0.01)。免疫荧光结果显示:在大鼠背根神经节中,TRPV1的表达与C组相比,R组和I组表达增加;与R组和I组相比,RI组显著增加,差异具有统计学意义(P0.01)。TRPV1主要分在小直径神经元中,在瑞芬太尼痛觉过敏中起到了重要的作用。脊髓组织中小胶质细胞表达瑞芬太尼组与正常对照组大鼠比较,可以发现表达量明显升高,差异具有统计学意义P0.01。瑞芬太尼组与切口痛组比较,大鼠脊髓组织中小胶质细胞IBA-1的表达并无明显差异,差异不具有统计学意义;瑞芬太尼+切口痛组与瑞芬太尼组比较,大鼠脊髓组织中小胶质细胞表达明显升高且差异具有统计学意义P0.01。表明在瑞芬太尼痛觉过敏的大鼠脊髓组织中小胶质细胞激活后会释放免疫介质,促进炎症因子的释放。同时,炎症因子的释放也会促进小胶质细胞的激活,产长时程调控,中枢敏化。Western Blot结果表明:与C组相比,R组、I组、RI组在背根神经节和脊髓背角中的TRPV1蛋白表达水平显著上调,具有统计学意义(P0.01);与I组或R组相比,RI组TRPV1表达增加(P0.01);R组和I组之间无统计学差异(P0.05)。Western blot和Elisa结果表明:瑞芬太尼组与正常对照组比较,大鼠脊髓组织中TNF-α蛋白表达明显升高,差异具有统计学意义P0.01;切口痛组I组与瑞芬太尼组R组比较,大鼠脊髓组织中TNF-α蛋白表达并无明显差异,差异不具有统计学意义。与其他组比较,瑞芬太尼+切口痛组,大鼠脊髓组织中TNF-α表达明显升高,且差异具有统计学意义P0.01。鞘内分别给予生理盐水和TRPV1抑制剂后进行疼痛行为学测定。结果显示:C组各时点PWL,不具有统计学意义(P0.05);与C组相比,C+CPZ组差异不具有统计学意义(P0.05)提示鞘内注射TRPV1抑制剂并未影响正常大鼠痛阈;与C组相比,R+I组和RI+CPZ组PWL阈值明显降低P0.01;与R+I组相比,RI+CPZ组PWL升高,差异具有统计学意义P0.01。分别给予不同剂量的TRPV1特异性拮抗剂。与RI组相比,CPZ 1、CPZ 2和CPZ 3组能提高热痛缩爪阈值,差异具有统一学意义P0.01。说明TRPV1拮抗剂能够有效改善瑞芬太尼痛觉过敏并且并呈剂量依赖性。结论1.瑞芬太尼输注速度为1.2μg·kg~(-1)·min~(-1),输注时间均为60min会诱发痛觉过敏,其机制与背根神经节和脊髓背角TRPV1的上调有关有关;2.TRPV1上调可激活小胶质细胞并促进TNF-α释放,加重疼痛,诱发痛觉过敏。3.TRPV1抑制剂可部分改善瑞芬太尼诱导的痛觉过敏,且成剂量依赖性。可为预防治疗瑞芬太尼痛觉过敏提供的新的思路与方法
[Abstract]:Objective To study the effect of refentanyl on the immune system . However , it is a safe , reliable , effective and resuscitation - effective analgesic drug . It can be activated by various regulatory factors . The results showed that the rate of infusion was 1 . 2渭g 路 kg ~ ( -1 ) 路 min ~ ( -1 ) , and the infusion time was 60 minutes ; the infusion rate of refentanyl was 1.2 渭g 路 kg ~ ( -1 ) 路 min ~ ( -1 ) , the infusion time was 1 . 2渭g 路 kg ~ ( -1 ) 路 min ~ ( -1 ) . The infusion time was 60 minutes ; Compared with group C and group I , the expression of TNF - 伪 protein in spinal cord tissue of rats increased significantly ( P0.01 ) . Compared with group I or group I , there was no significant difference in the expression of TNF - 伪 protein in spinal cord tissue of rats . Compared with group C , CPZ 1 , CPZ 2 and CPZ 3 groups could improve the threshold of pain and increase the pain and induce analgesia .
【学位授予单位】：天津医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2017
【分类号】：R614

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