mTOR信号通路在蛛网膜下腔出血后早期脑损伤中的作用及机制研究

发布时间：2018-07-10 01:48

  本文选题：蛛网膜下腔出血 + 早期脑损伤　； 参考：《苏州大学》2015年硕士论文

【摘要】：目的:哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mammalian target of rapamycin,m TOR)是一种进化上相对保守的丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶,参与体内多种生物过程,包括自噬、蛋白合成、脂质合成、肌动蛋白动力学、神经元形态学等。蛛网膜下腔出血(subarachnoid hemorrhage,SAH)后脑损伤的机制甚多,小胶质细胞的激活在其中作用显著。哺乳动物雷帕霉素靶蛋白对细胞的增殖活化有明显的促进作用。迄今尚没有关于m TOR在SAH后小胶质细胞激活中的作用研究。目前研究表明蛛网膜下腔出血后m TOR信号通路激活、小胶质细胞激活。但其作用机制还有待进一步探讨。为此,在本研究中,我们第一次探讨蛛网膜下腔出血后m TOR信号通路在不同时间的的表达,并研究了抑制该信号通路能否改善蛛网膜下腔出血后的早期脑损伤(early brain injury,EBI)及其可能机制。研究方法:24只健康成年雄性Sprague-Dawley(SD)大鼠随机分为4组,每组6只,假手术组,SAH-3h组,SAH-24h组,SAH-72h组。主要探究蛛网膜下腔出血模型中m TOR通路的时间点表达。将72只SD大鼠分为四个组,sham组18只,SAH+溶剂组18只,SAH+雷帕霉素组18只,SAH+AZD8055组18只。本实验采用视交叉前池注血模型:SD大鼠视交叉前脑室20秒内注入0.3ml无肝素动脉血,从而建立实验性蛛网膜下腔出血动物模型。在SAH+雷帕霉素组中,模型建立的第4个小时,腹腔注射雷帕霉素(150ug/kg)。SAH+AZD8055组中,同样在建模后第4小时,AZD8055以14mg/kg剂量腹腔注射。SAH动物模型建立完毕的第24小时处死大鼠,取出大鼠额颞底皮层脑组织做标本,采用蛋白质印迹(western-blot)分析脑组织中m TOR信号通路表达情况,免疫荧光染色来分析小胶质细胞的表达,干湿法测定水肿指数,western-blot分析脑组织中白蛋白含量来评价出血后的血脑屏障(blood brain barrier BBB)的通透性,TUNEL与FLUORO-JADE B荧光染色测定神经细胞的凋亡及坏死比率,相关的试剂盒来测定新鲜脑组织中细胞因子释放。结果:通过各种之间的蛋白表达水平的比较,得出蛛网膜下腔出血后,m TOR及其下游P70S6K总量无明显变化(P0.05),但其磷酸化水平显著增高(P0.05),并在第24小时达到最高。免疫荧光结果显示:与正常组相比,安慰剂SD大鼠皮质小胶质细胞显著激活(P0.01),雷帕霉素及AZD8055组SD大鼠与安慰剂组SD大鼠相比,小胶质细胞表达显著降低(P0.05),雷帕霉素与AZD8055组间无明显差别(P0.05)。ELISA结果显示:与正常组相比,安慰剂SD大鼠皮质TNF-α、IL-1β含量明显增高(P0.05),雷帕霉素及AZD8055组SD大鼠与安慰剂组SD大鼠相比,小胶质细胞表达显著降低(P0.05),雷帕霉素与AZD8055组间无明显差别(P0.05)。免疫蛋白印迹结果显示:p-m TOR,p-P70S6K,p-4EBP1在正常组低表达,与正常组相比,安慰剂组样本上上述蛋白表达水平明显增高(P0.01),而雷帕霉素及AZD8055组与安慰剂组相比上述蛋白表达明显减少(P0.05)。雷帕霉素、AZD8055一定程度上减轻了SAH后的早期脑损伤,包括了细胞凋亡、坏死、脑水肿以及血脑屏障破坏指标。结论:蛛网膜下腔出血后,m TOR信号通路被激活,雷帕霉素、AZD8055通过抑制m TOR信号通路从来一定程度上减轻了SAH模型中早期脑损伤,这有可能是通过抑制小胶质细胞的激活来实现的。
[Abstract]:Objective : To investigate the role of mammalian rapamycin target protein in the treatment of subarachnoid hemorrhage ( SAH ) . 骞叉箍娉曟祴瀹氭按鑲挎寚鏁，

本文编号：2111548