Mir-34a-5p通过调控AGTR1基因的表达促进骨肉瘤细胞化疗耐药

发布时间：2018-07-17 07:48

【摘要】：背景化疗药物耐受严重影响肿瘤临床的治疗疗效。MicroRNAs(miRNAs)在癌细胞化疗耐药性的多种生物学过程起到关键作用。目的分析mir-34a-5p和AGTR1在骨肉瘤细胞化疗耐受中的作用机制。方法1.依据RNA-Seq和miR-omic组学分析,结合mi RBase、Targetscan和CHIPBase三个数据库对mi R-34a-5p的下游靶基因进行预测,寻找可能受到miR-34a-5p调控的基因。2.采用qRT-PCR、western blot技术检测骨肉瘤(OS)化疗敏感细胞株G-292和化疗耐受细胞株SJSA-1细胞中mir-34a-5p和血管紧张素Ⅱ1型受体(AGTR1)的表达水平。3.采用双荧光素酶报告系统检测mir-34a-5p是否与AGTR1的3’-UTR序列结合,验证AGTR1是否为mir-34a-5p的直接靶基因。4.在G-292细胞中转染mir-34a-5p的mimic和si-AGTR1,并在SJSA-1细胞中转染mir-34a-5p的antagomir和GFP-AGTR1。应用qRT-PCR分析,验证AGTR1在细胞内的表达是否受到mi R-34a-5p mimic和antagomir转染的影响。5.通过骨肉瘤化疗敏感性检测(MTT)、细胞凋亡、细胞增殖和裸鼠移植瘤实验验证mir-34a-5p和AGTR1在骨肉瘤细胞化疗耐受中的作用机制。结果1.RNA-Seq和mi R-omic组学数据均表明mir-34a-5p在耐受细胞株SJSA-1中的表达水平明显高于敏感细胞株G-292细胞中的表达水平,而AGTR1的表达水平相反,提示AGTR1可能是mir-34a-5p下游靶基因之一。2.qRT-PCR、western blot结果表明,mir-34a-5p在SJSA-1中的表达水平明显高于G-292细胞中的表达水平,而AGTR1的表达水平相反,在耐受细胞株SJSA-1中的表达水平明显低于敏感细胞株G-292细胞中的表达水平。3.双荧光素酶报告系统检测结果发现,mir-34a-5p可与AGTR1的3’-UTR序列结合,降低细胞内荧光活性,证明AGTR1是mir-34a-5p的靶基因。4.在G-292细胞中转染mir-34a-5p的mimic,si-AGTR1,AGTR1的m RNA和蛋白表达下调;在SJSA-1细胞中转染mir-34a-5p的antagomir,GFP-AGTR1 AGTR1的mRNA和蛋白表达上调。结果表明mir-34a-5p负调控靶基因AGTR1。5.骨肉瘤细胞化疗敏感性检测(MTT)结果表明,mir-34a-5p的mimic能够促进骨肉瘤细胞的化疗耐受,而mir-34a-5p的antagomir能够降低骨肉瘤细胞的化疗耐受,si-AGTR1干扰后化疗敏感性的MTT检测结果与mir-34a-5p的mimic结果一致,能提高骨肉瘤细胞的化疗敏感性,而GFP-AGTR1与mir-34a-5p的antagomir的结果一致,能降低骨肉瘤细胞的化疗敏感性。该结果与细胞凋亡实验和裸鼠移植瘤实验保持一致。结论mir-34a-5p是通过AGTR1基因参与调控骨肉瘤细胞化疗耐受的,预示mir-34a-5p可以作为评估骨肉瘤患者预后的分子指标。
[Abstract]:Background chemotherapeutic drug tolerance seriously affects the therapeutic efficacy of tumor. MicroRNAs (miRNAs) play a key role in the biological process of chemotherapeutic resistance of cancer cells. Objective to investigate the role of mir-34a-5p and AGTR1 in chemotherapy tolerance of osteosarcoma cells. Method 1. Based on RNA-Seq and miR-omic analysis, the downstream target genes of mi R-34a-5p were predicted with the combination of three databases: mi RBasesi-Targetscan and CHIPBase, and the gene .2which might be regulated by miR-34a-5p was found. The expression levels of mir-34a-5p and angiotensin 鈪，

本文编号：2129663