bFGF和NMDA受体在神经病理性疼痛中的相互调控作用

发布时间：2018-09-04 19:51

【摘要】：第一部分NMDA受体拮抗剂对神经病理性疼痛大鼠脊髓背角bFGF表达的影响目的探讨鞘内间断多次给予N-甲基-D-天门冬氨酸(NMDA)受体拮抗剂对坐骨神经分支选择性损伤模型(SNI)大鼠神经病理性疼痛的缓解作用及其可能的机制。方法72只雄性SD大鼠随机分为6组(n=12)：假手术组(S组)、坐骨神经分支选择性损伤组(NP组)、氯胺酮低剂量组(K1组)、氯胺酮高剂量组(K2组)、MK-801低剂量组(M1组)、MK-801高剂量组(M2组)。S组仅暴露坐骨神经,NP组、K1组、K2组、M1组、M2组制备坐骨神经分支选择性损伤模型。从术后1d开始,K1组、K2组、M1组、M2组通过鞘内置管分别注射氯胺酮50ug、氯胺酮100ug、MK-801 5ug和MK-80110ug,容量均为10ul,S组和NP组通过鞘内置管注射0.9%生理盐水10ul,1次/d,连续给药7d。分别于术前1d和术后1-7d,进行疼痛行为学观察和机械刺激缩足反射阈值(PWMT)测定。术后第7d处死大鼠取L4～6节段脊髓,免疫组化测定胶质纤维酸性蛋白(GFAP)和碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)表达变化,Western blot检测bFGF蛋白表达变化。结果与S组比较,NP组PWMT明显降低(P0.05),GFAP蛋白含量明显升高(P0.05)；与NP组比较,K1组、K2组、M1组和M2组PWMT出现升高(P0.05),bFGF、GFAP蛋白含量明显降低(P0.05),并成剂量依赖性。结论鞘内间断多次给予NMDA受体拮抗剂可缓解SNI引起的大鼠痛觉过敏,其机制可能与抑制bFGF蛋白表达及星形胶质细胞活化有关。第二部分bFGF对神经病理性疼痛大鼠脊髓NMDA受体表达的影响目的探讨碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)在大鼠神经病理性疼痛中的作用及对脊髓N-甲基-D-天门冬氨酸(NMDA)受体亚基表达的影响。方法48只雄性SD大鼠随机分为假手术组(A组)、假手术+bFGF抗体组(B组)、SNI组(C组)、SNI+bFGF抗体组(D组),每组12只。制备坐骨神经分支选择性损伤(SM)模型。其中B组和D组于建模后1d、6d、9d、13d、16d、20d蛛网膜下腔注入稀释至40ul的bFGF抗体18μg。A组和C组则在同一时间注射等体积磷酸盐缓冲液(PBS)。分别于术前1d和术后1d、4d、7d、14d、21d测定机械刺激缩足反射阈值(PWMT)。术后第21d处死大鼠取L4～6节段脊髓,免疫组化测定胶质纤维酸性蛋白(GFAP)表达,RT-PCR及estern blot检测NMDA受体亚基NR1、 NR2A、和NR2B表达变化。结果与A组和B组比较,C组和D组PWMT降低,脊髓GFAP、NR1和NR2B表达升高(P0.05)。与C组比较,D组PWMT升高,脊髓GFAP、 NR1和NR2B表达降低(P0.05)。结论鞘内注射bFGF抗体能缓解SNI大鼠神经病理性疼痛,其机制可能与其调节NR1和NR2B表达有关。
[Abstract]:Part I Effects of NMDA receptor antagonists on the expression of bFGF in spinal dorsal horn of rats with neuropathic pain Objective To investigate the Alleviative Effect of N-methyl-D-aspartate (NMDA) receptor antagonists on neuropathic pain induced by selective sciatic nerve branch injury (SNI) and its possible mechanism in 72 rats. Male SD rats were randomly divided into 6 groups (n=12): sham operation group (S group), sciatic nerve branch selective injury group (NP group), ketamine low dose group (K1 group), ketamine high dose group (K2 group), MK-801 low dose group (M1 group), MK-801 high dose group (M2 group). From the first day after operation, K1 group, K2 group, M1 group and M2 group were injected with ketamine 50ug, ketamine 100ug, MK-8015ug and MK-80110ug respectively through intrathecal catheter. The volume of each group was 10ul. S group and NP group were injected with 0.9% saline 10ul once a day through intrathecal catheter for 7 days before operation and 1-7 days after operation. The expression of glial fibrillary acidic protein (GFAP) and basic fibroblast growth factor (bFGF) was detected by immunohistochemistry. The expression of bFGF protein was detected by Western blot. Results Compared with S group, PWMT and GFAP protein in NP group were significantly decreased (P 0.05). Compared with NP group, PWMT increased in K1 group, K2 group, M1 group and M2 group (P 0.05), and the contents of bFGF and GFAP decreased significantly (P 0.05) in a dose-dependent manner. In the second part, the effect of bFGF on the expression of NMDA receptor in spinal cord of rats with neuropathic pain Objective To investigate the effect of bFGF on neuropathic pain and the expression of N-methyl-D-aspartate receptor subunit in spinal cord of rats. Methods 48 male SD rats were randomly divided into artificial hands. Surgical group (group A), sham operation + bFGF antibody group (group B), SNI group (group C), SNI + bFGF antibody group (group D), 12 rats in each group. Selective injury of sciatic nerve branches (SM) models were prepared. Subarachnoid injection of 18 UG bFGF antibody diluted to 40 UL was performed in group B and D at 1, 6, 9, 13, 16 and 20 days after modeling. Buffer solution (PBS) was used to determine the mechanical stimulation foot reflex threshold (PWMT) 1 day before operation and 1 day, 4 days, 7 days, 14 days and 21 days after operation. L4-6 segments of spinal cord were sacrificed on the 21st day after operation. The expression of glial fibrillary acidic protein (GFAP) was detected by immunohistochemistry. The expression of NMDA receptor subunits NR1, NR2A, and NR2B was detected by RT-PCR and estern blot. Conclusion Intrathecal injection of bFGF antibody can alleviate neuropathic pain in SNI rats, and its mechanism may be related to the regulation of NR1 and NR2B expression.
【学位授予单位】：重庆医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R614

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本文编号：2223165