不同缺血预调适方案对大鼠肢体骨骼肌缺血再灌注损伤影响的实验研究

发布时间：2018-10-15 13:24

【摘要】：目的：研究3个不同缺血预调适方案对大鼠肢体骨骼肌缺血再灌注损伤模型的影响,通过对骨骼肌组织学光镜观察和超微结构观察,测定骨骼肌湿/干比值、血清乳酸脱氢酶(LDH)和肌酸激酶(CK)活性,检测骨骼肌坏死程度,比较3种不同缺血预调适方案对肢体缺血再灌注损伤保护效果的差异,从中筛选出最优方案,为进一步实验研究奠定基础。方法：使用无创动脉夹夹闭大鼠右侧后肢股动脉,再灌注时松开动脉夹,建立肢体缺血再灌注损伤模型。健康成年雄性SD大鼠48只,随机分为缺血再灌注组(缺血组)、缺血预调适A、B、C组共4组(n=12/组),缺血再灌注组为单纯缺血再灌注组,于夹闭股动脉4小时后,恢复灌注。缺血预调适A组采用夹闭股动脉2分钟,开夹2分钟,依此循环6次,再夹闭股动脉缺血4小时,后恢复灌注。缺血预调适B组采用夹闭股动脉5分钟,开夹5分钟,依此循环3次,再夹闭股动脉缺血4小时,后恢复灌注。缺血预调适C组采用夹闭股动脉1分钟,开夹1分钟,依此循环10次,再缺血4小时,后恢复灌注。缺血组和缺血预调适组分别于再灌注后2小时、12小时、24小时时间点取股静脉血和左、右后肢小腿肌组织,并处死大鼠。股静脉血离心,取血清用ELISA法测定LDH和CK活性变化。取右后肢小腿比目鱼肌,用HE染色观察骨骼肌炎症、水肿和坏死等病理学改变,用醋酸铀-柠檬酸铅染色,通过透射电镜观察骨骼肌超微结构改变。取左(自身空白对照)、右后肢腓肠肌称取湿重,干燥后称取干重,计算湿干重比。切取右后肢胫前肌,用TTC染色,观察肌肉颜色变化并用SCION IMAGE图像软件计算坏死面积百分比,对比各组实验结果。结果：缺血组再灌注后三个时间点(2小时、12小时、24小时)的CK值和LDH值均高于预调适组(P0.05)；再灌注后2小时,预调适A组的CK值和LDH值低于B、C组(P0.05),预调适B组的CK值和LDH值低于C组(P0.05)；再灌注后12小时,预调适A组的CK值和LDH值与B组无显著差异(P0.05),预调适A组的CK值和LDH值均低于C组,再灌注24小时,预调适B组的CK值和LDH值均低于A、C组(P0.05),预调适A组的CK值和LDH值低于C组(P0.05)。湿/干重比：缺血组再灌注后24小时湿干重比值最大,预调适A组再灌注后2小时比值最小,缺血组不同时间点的比值均大于预调适组(P0.05),再灌注12小时内预调适A组的比值均小于B、C组(P0.05),预调适B组的比值低于C组(P0.05)；再灌注后12-24小时内,预调适B组的比值低于A、C组(P0.05),预调适A组的比值优于C组(P0.05)。TTC染色结果：缺血组坏死面积比均高于预调适三组,再灌注后12-24小时内,预调适B组的坏死面积最少。HE染色示缺血组再灌注24小时可见肌原纤维变性扭曲中度水肿,横纹结构紊乱,部分区域核固缩消失,血管充血,中性粒细胞浸润预调适A组、预调适B组、预调适C组24小时骨骼肌损伤情况均轻于缺血组,其中以预调适A组、预调适B组骨骼肌损伤最少。电镜观察示缺血组再灌注24小时肌原纤维重度水肿、排列紊乱,肌丝溶解断裂,糖元颗粒减少,线粒体肿胀,肌质网扩张。再灌注24小时,预调适A组、预调适B组、预调适C组肌原纤维排列紊乱、横纹结构破坏、线粒体肿胀、肌质网扩张均明显轻于缺血组,其中以预调适B组超微结构改变最少。结论：缺血预调适能减轻肢体缺血再灌注损伤,通过降低血浆中的CK、LDH含量,减少骨骼肌坏死面积,减轻损伤程度,从而起到保护作用。三种缺血预调适方案的保护效果具有差异性,且缺血预调适的保护具有时间限制。综合分析,以3个循环5分钟缺血/5分钟再灌的预调适方案保护效果最优。
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【学位授予单位】：广西医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R687

【参考文献】