常山酮治疗小鼠早期骨性关节炎疗效研究

发布时间：2018-11-11 17:34

【摘要】：目的:研究常山酮对ALCT切断小鼠早期骨性关节炎模型的治疗作用的试验研究。方法:健康C57BL6J雄性小鼠90只,随机分为一个月试验组和两个月试验组,每组45只,然后再将其分为假手术组(sham组)、安慰剂组(ALCT+Vehicle组)、治疗组(ALCT+Halofuginone组),每组15只,假手术组只打开小鼠右膝关节囊不损伤其他部位,术后不做处理;其余两组均为切断小鼠右膝前交叉韧带造骨性关节炎模型,一个月组的处理为:安慰剂组术后第三天开始给予蒸馏水隔天灌胃至30天;治疗组术后第三天开始按0.5mg/kg常山酮隔天灌胃至30天。蒸馏水和常山酮按照0.2ml的体积隔天灌药一次,灌胃30天后处死;二个月组的处理为:安慰剂组术后第三天开始给予蒸馏水按照0.2ml的体积隔天灌胃至30天,再静养30天;治疗组术后第三天开始按0.5mg/kg的常山酮剂量配成0.2ml的体积隔天灌胃至30天,再静养30天。期满后处死后取下小鼠右膝关节,做HE染色和番红固绿染色观察关节组织的形态和结构;做免疫组织化学检测关节软骨中TGF-β1、MMP-13、COLX蛋白的表达量;作免疫组化检测软骨下骨中的Psmad蛋白的表达量以及免疫组化检测软骨下骨中的成骨细胞标记物Osterix和TRAP细胞数量。结果:6组动物全部存活至实验完成,切口愈合良好。组织学观察,sham组:软骨结构正常,透明软骨细胞排列整齐,分3层,第一层的软骨细胞梭形,其长轴水平排列;第二层圆形的软骨细胞没有规律的排列;第三层柱状排列的软骨细胞与长轴垂直。钙化层的软骨细胞明显肥大。各层细胞间质较多,无裂隙。ALCT+Vehicle组:排列紊乱的细胞在软骨内有着不均匀的细胞密度,表层明显看到细胞密度增加或减少,在移行层也有类似现象。关节软骨层变薄且染色不均匀,软骨层裂隙较多伴有碎裂现象;增值的软骨细胞聚集成巢状;ALCT+Halofuginone组:软骨细胞分层清晰有序,细胞形态较规则,潮线明显可见,软骨钙化层的细胞肥大。二个月组:sham组:关节软骨结构正常,细胞排列整齐,软骨细胞分层清晰有序,大致还是分3层,细胞形态较规则,潮线明显可见,软骨钙化层的细胞肥大。ALCT+Vehicle组:排列紊乱的细胞在软骨内有着不均匀的细胞密度,表层明显看到细胞密度增加或减少,在移行层也有类似现象。软骨层裂隙较多伴有碎裂现象;增值的软骨细胞聚集成巢状;ALCT+Halofuginone组:关节软骨结构基本正常,细胞排列较为整齐,软骨细胞分层清晰有序,细胞形态较规则,软骨钙化层的细胞肥大,各软骨层无明显裂隙。一个月组中sham、ALCT+Vehicle、ALCT+Halofuginone三组透明软骨厚度/钙化软骨(HC/CC)分别为:(1.47±0.20)、(0.77±0.13)、(1.2±0.09)3组比较有统计学意义(P0.05);二个月组中sham、ALCT+Vehicle、ALCT+Halofuginone三组透明软骨厚度/钙化软骨(HC/CC)分别为:(1.24±0.25)、(0.58±0.15)、(1.04±0.11);3组比较有统计学意义(P0.05)。一个月时sham、ALCT+Vehicle、ALCT+Halofuginone组OARSI评分分别为(0.53±0.52)、(9.27±2.60)、(4.53±1.30)分,3组比较有统计学意义(P0.05);二个月时sham、ALCT+Vehicle、ALCT+Halofuginone组OARSI评分分别为(1.53±0.55)、(12.27±2.81)、(6.85±1.52)分,3组比较有统计学意义(P0.05)。关节软骨免疫组织化学染色观察:一个月时,sham、ALCT+Vehicle、ALCT+Halofuginone三组关节软骨中TGF-β1阳性细胞/软骨细胞分别为(0.054±0.013)、(0.239±0.032)、(0.157±0.029)分;3组比较有统计学意义(P0.05);二个月时,sham、ALCT+Vehicle、ALCT+Halofuginone三组关节软骨中TGF-β1阳性细胞/软骨细胞分别为(0.069±0.018)、(0.331±0.041)、(0.213±0.026)分;3组比较有统计学意义(P0.05)。软骨下骨免疫组织化学染色观察:sham、ALCT+Vehicle、ALCT+Halofuginone三组关节软骨下骨中TRAP阳性细胞/细胞分别为(18.33±1.43)、(109±11.16)、(35±2.83)分;3组比较有统计学意义(P0.05);sham、ALCT+Vehicle、ALCT+Halofuginone三组关节软骨下骨中Osterix阳性细胞/细胞分别为(14.33±0.95)、(206±23.46)、(85±17.89)分;3组比较有统计学意义(P0.05)。结论:常山酮0.5mg/(kg·d)灌胃能部分有效阻止小鼠早期骨性关节炎关节软骨退变,其作用机制可能是降低表达TGF-β1,进而影响Psmad通路以及减少破骨细胞的生成从而延缓骨性关节炎的进展。
[Abstract]:......
【学位授予单位】：新疆医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2017
【分类号】：R684.3

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本文编号：2325624