对比三硝基苯磺酸与葡聚糖硫酸钠诱导大鼠回肠贮袋炎的实验研究

发布时间：2019-01-18 18:42

【摘要】：目的:利用显微外科操作技术建立大鼠全结直肠切除、回肠贮袋肛管吻合(ileal pouch-anal anastomosis,IPAA)模型,比较三硝基苯磺酸(trinitrobenzenesulfonic acid,TNBS)和葡聚糖硫酸钠(dextran surfate sodium,DSS)诱导大鼠回肠贮袋炎模型的特点,为回肠贮袋炎的研究提供可靠的动物模型。方法:利用显微外科技术建立雄性SD大鼠IPAA模型,将建立的大鼠模型进行随机分组,共分为5组:即IPAA+DSS组,IPAA术后第31天开始,给予4%DSS溶液100ml,连续4天;IPAA+TNBS组,IPAA术后第31天,给予混合50%无水乙醇的TNBS(200mg/kg)按1:1的体积比经肛门灌肠1次;IPAA+NS组,IPAA术后第31天,给予0.9%生理盐水经肛门灌肠1次;IPAA组为无干预组,即IPAA术后未进行任何干预;Sham组为假手术组,只进行开关腹操作。实验期间对大鼠造影剂灌肠后进行贮袋造影检查,观察造影剂在贮袋内的变化并探索对大鼠灌肠时的体位及灌肠管插入的长度。实验期间观察并记录各组大鼠一般状况(如精神状态、活动度)、体重变化、血便情况、粪便性状(评分);采用粪便直接涂片法检测各IPAA模型组大鼠粪便菌群的分布情况;术后第35天取IPAA+DSS组、IPAA+TNBS组、IPAA+NS组、IPAA组大鼠的小肠近端、小肠中段、小肠远端组织及贮袋组织,取Sham组大鼠小肠近端、小肠中段、小肠远端组织,采用HE染色法进行组织病理学检测并进行评分;采取免疫组织化学法检测各组组织肠黏膜紧密连接蛋白Occludin的表达水平并进行评分。结果:1.回肠贮袋造影结果回肠贮袋造影结果显示,大鼠左侧卧位时给予灌肠,造影剂可充分与回肠贮袋黏膜接触,充盈贮袋,并确定灌肠管插入的肛门深度为3.5cm。2.一般情况及体重变化IPAA+DSS组及IPAA+TNBS组的大鼠均出现不同程度的懒惰、倦怠,毛发枯燥,没有光泽,IPAA+NS组、IPAA组及Sham组大鼠活动敏捷,毛发光亮;IPAA术后大鼠体重均出现下降,约在术后4周恢复术前体重,Sham组大鼠体重稳定增长;术后第31天进行干预,IPAA+DSS组大鼠体重出现持续下降,4天后,下降幅度为(58.83±5.88)g,IPAA+TNBS组大鼠体重同样出现持续下降,下降幅度为(28.67±5.57)g,两者比较,IPAA+TNBS组的大鼠体重下降幅度小于IPAA+DSS组,差异有统计学意义(P0.05),IPAA+NS组、IPAA组及Sham组的大鼠体重稳定增长。3.血便情况及粪便性状IPAA+DSS组大鼠均出现血便(6/6),IPAA+TNBS组大鼠均出现稀便,其中部分大鼠出现黏液脓血便(3/6),IPAA+NS、IPAA+NI及Sham组的大鼠为正常便。干预前,各组大鼠间粪便评分比较,差异无统计学意义(P0.05),IPAA+DSS组及IPAA+TNBS组大鼠干预后,粪便评分(1.50±0.55)、(1.67±0.82)均低于IPAA+NS组、IPAA组及Sham组的大鼠(4.01±0.89)、(4.33±0.82)、(4.03±0.78),差异有统计学意义(F=16.96,P0.01),IPAA+DSS组大鼠及IPAA+TNBS组两组大鼠粪便评分比较,差异无统计学意义(P0.05)。4.粪便菌群分布情况粪便菌群分布结果显示,IPAA+DSS组,细菌总数略减少,革兰阳性杆菌较正常范围明显减少,革兰阴性杆菌较正常范围增多,革兰阳性球菌和革兰阴性球菌在正常范围;IPAA+TNBS组细菌总数略减少,革兰阳性杆菌较正常显著减少,革兰阴性杆菌较正常范围明显增多,革兰阳性球菌和阴性球菌在正常范围;IPAA+NS、IPAA+NI组的大鼠粪便菌群分布正常。5.各组大鼠贮袋及小肠组织病理学检测结果干预后,IPAA+DSS组和IPAA+TNBS组大鼠贮袋病理组织学评分均高于IPAA组、IPAA+NS组、Sham组(F=55.068,P0.05),且IPAA+TNBS组贮袋评分高于IPAA+DSS组,差异有统计学意义(P0.05),IPAA+NS组、IPAA组及Sham组的大鼠比较,差异无统计学意义(P0.05);小肠组织的病理组织学评分,IPAA+DSS组高于IPAA+TNBS组、IPAA+NS组、IPAA组及Sham组大鼠,差异有统计学意义(F=76.156,P0.05),IPAA+TNBS组和IPAA+NS组、IPAA组及Sham组的大鼠比较,差异无统计学意义(P0.05)。6.免疫组化结果免疫组化结果显示,回肠贮袋组织肠屏障紧密连接蛋白Occludin的表达水平,IPAA+DSS组和IPAA+TNBS组均低于IPAA+NS组、IPAA组及Sham组大鼠,差异有统计学意义(F=23.781,P0.01),且IPAA+TNBS组低于IPAA+DSS组(P0.05),IPAA+NS组、IPAA组及Sham组的大鼠比较,差异无统计学意义(P0.05)。小肠近端、中段、远端的Occludin蛋白表达,IPAA+DSS组低于IPAA+TNBS组、IPAA+NS组、IPAA组及Sham组大鼠,差异均有统计学意义(P0.05),IPAA+TNBS组和IPAA+NS组、IPAA组及Sham组的大鼠比较,差异无统计学意义(P0.05)。结论:1.利用显微外科技术,成功建立稳定的大鼠IPAA模型;2.利用DSS和TNBS均可诱导大鼠回肠贮袋炎模型;3.TNBS诱导的大鼠回肠贮袋炎模型中菌群总数较DSS诱导菌群总数低,杆菌分布的变化较DSS诱导的IPAA模型严重;TNBS诱导下的大鼠回肠贮袋的病理组织学损伤较DSS所诱导的严重,DSS诱导下的大鼠非贮袋小肠组织的病理组织学损伤较TNBS所诱导的严重;TNBS诱导的大鼠贮袋回肠贮袋炎组织的肠屏障结构损伤较DSS所诱导的严重,DSS诱导下的大鼠非贮袋小肠组织的肠屏障损伤较TNBS所诱导的严重;4.在建立大鼠回肠贮袋模型基础上给予适量TNBS可以建立比DSS更加稳定稳定的大鼠回肠贮袋炎模型,且减轻非贮袋组织的损伤。
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【学位授予单位】：天津医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2017
【分类号】：R656.9

【参考文献】